Formation of Fungal Protoplast by the Reaction of Cell Wall Lytic Enzymes

섬유소 가수분해효소와 Chitinase 처리에 의한 균류 원형질체 생성에 관한 연구

Osmotically sensitive fungal protoplasts were liberated from the mycelium of several kinds of molds by mixed enzyme system of cellulase from Trichoderma viride $TO_4$ and chitinase from the culture filtrate of Streptomyces sp. 115-5. Relatively higher number of protoplast were released from young mycelium of Zygomycetes strains than Ascomycetes strains by using 10 mM phosphate buffer (pH 6.0) and 0.6 M NaCl as osmotic stabilizer. Protoplasts were released through ruptures in the wall, initially at the apices, but later also from old party of the hyphae.

균류의 세포벽은 복합 다당류의 매우 견고한 막으로 되어있기 때문에 균체의 이용이나 세포막 관련성 효소연구등에 직접적으로 방해가 되어왔기 때문에 이의 제거를 위해 본 실험에서는 Trichoderma viride $TO_4$ 균주에서 얻은 섬유소 가수분해효소와 토양에서 직접 분리한 Streptomyces sp. 115-5균주에서 얻은 chitinase를 혼용하여 각종 균사체에 작용시켜 세포벽의 제거정도에 따른 원형질체 생성을 균체별로 측정하여 그 결과를 얻었다. (1) Ascomycetes 류에서는 반응 3시간후 $3{\times}10^{7}$개의 원형질체가 생성되었다. (2) Zygomycetes류에서는 반응 3시간후 $9{\times}10^7$개의 원형질체가 생성 되었다. (3) 효모류는 이 혼합효소작용에 대하여 별다른 반응을 나타내지 않았다.