Studies on the Inulin Hydrolyzing Enzyme from Aspergillu sp. (C-58) (III) - Purification of inulase (P-I) from Aspergillus sp. (C-58) -

Aspergillus sp. (C-58)균주가 생산하는 Inulin 분해효소에 관한 연구 - Aspergillus sp. C-58균주가 생산하는 inulase P-I의 정제 -

The extracellular inulase produced by Aspergillus sp. C-58 was isolated by pH and charcoal treatment, precipitation with ammonium sulfate from the crude extract, and separated into 3 fractions (P-I, II, III) by DEAE-cellulose column chromatography in the ratio of 31.1:1.7:1 with respect to the activity. The ratio of inulase activity to sucrase activity of P-I, P-II and P-III fraction was 0.23, 0.24 and 1.1 respectively. The enzyme P-I fraction was purified 482 fold with a 22.8% yield by DEAE-Sephadex A-50, Sephadex G-75, Sephadex G-100 (1st and 2nd) column chromatography, and appeared homogeneous on polyacrylamide disc gel electrophoresis and ultracentrifugation.

Aspergillus sp.C-58 균주가 생산하는 extracellular inulase에 대하여 pH, charcoal처리 및 ammonium sulfate로 분별염석한 후 DEAE- cellulose를 이용한 column chromatography에 의하여 3개의 효소단백질(Peak I, II, III)로 분획되었으며 그 비율은 31. 1 : 1.7 : 1이였다. P- I, II의 I/S는 그 비율이 0.23 및 0.24로 거의 동일하였으나 P-III는 1.1로 P-I및 P-II와 상이하였다. Peak I 효소에 대하여 DEAE-Sephadex A-50을 이용한 ion exchange chromatography에 의하여 추출효소에 비교하여 약 408배 정제되었으며 다시 Sephadex G-75 및 Sephadex G-100에 2회 gel filtration하여 약 482배 정제되었다. 이상과 같이 정제한 Peak I의 효소액은 poly acrylamide를 이용한 disc gel electrophoresis 및 ultra centrifugation에 의하여 단일 단백질로 확인되었다.