Studies on the production and purification of an extracellular protease from a nonpigmenting Serration sp.

Nonpigmenting Serratia sp.에서 균체의 단백질 분해효소의 생성과 정제에 관한 연구

Cultivation conditions for the production of extracellular alkaline protease by a nonpiamentation Serratia sp. and purification of the enzyme were studied. The maximum enzyme level was obtained at the beginning of stationary phase when the organism was cultured on brain heart infusion medium at $25^{\circ}C$ under aeration (gyratory shaking, 180 cycles/min). The enzyme was purified about 100 fold with 16.5％ yield by ammonium sulfate precipitation, ammonium sulfate fractionation followed by DEAE-cellulose chromatography (1st and 2nd). The purified enzyme moved as a single symmetrical peak in the analytical ultracentrifuge. The enzyme demonstrated its maximum activity at pH 8.5-9.0 and 4$0^{\circ}C$ when vitamin-free casein was used as a substrate.

색소를 형성하지 못하는 Serratia sp. LW-1 균주의 균체의 protease생성조건을 검토하고 효소를 간단한 방법으로 정제하였다. 효소 생산을 위한 최적온도는 brain heart infusion배지에서 $25^{\circ}C$이었으며, 배양후 76-80시간에 최고의 균체의 효소활성을 나타냈다. Aeration효과는 5$\ell$용 flask에 배지량을 1$\ell$주입하여 180 cycles/min으로 진탕배양 하였을 때가 aeration하지 않았을 경우보다 약 8배의 균체의 효소생산을 보였다. 효소의 정 제는 ammonium sulfate침 전, ammonium sulfate분별염석 및 두번의 DEAE-cellulose column 크로마토그라피에 의하여 수행하였으며, 정제된 효소는 정제도가 약 100배, 회수율이 16%이었다. 정제된 효소는 analytical ultracentrifuge pattern에서 단일 단백질로 나타났으며 최고 활성을 나타내는 pH는 vitamin free casein을 substrate로 사용하였을 때 pH 8.5-9.5이었고 최적온도는 4$0^{\circ}C$ 근처이었다