A Study on Protoplast Isolation and Culture of Legume Plant

두과작물(荳科作物)의 원형질체(原形質體) 나출(裸出) 및 배양기술확립(培養技術確立)에 관(關)한 연구(硏究)

Protoplasts of Pisum sativum L. were isolated and cultured from leaf mesophyll tissue. The successful yield of protoplast was obtained in an enzyme solution of 2% 'Onozuka R-10' and 2 % 'Macerozyme R-10' contained 6mM $CaCl_2{\cdot}2H_2O$ within 4 hours. They were divided in B5 culture medium supplemented with 2mg/l kinetin, 1mg/l 2, 4-D and 0.2% Difcobacto agar. Divisions of the protoplasts were continued and led to colony formation for 1 months. The colony from protoplasts of pea mesophyll tissue was formed to callus after subculture in a medium contained macronutrients and amino acids of BII medium and micronutrients and vitamins of B5 medium, and also supplemented with 2mg/l kinetin 2mg/l NAA.

두과작물중(荳科作物中) 대두(大豆)의 callus와 녹두 및 완두의 전개(展開)된 어린 잎의 엽육조직(葉肉組織)을 재료(材料)로 하여 원형질체를 나출(裸出)하고 배양(培養)하는 실험(實驗)을 실시(實施)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 대두(大豆)의 callus나 녹두(綠豆)의 엽육조직(葉肉組織)을 'Onozuka R-10'과 'Macerozyme R-10'이 각각(各各) 2% 포함된 E1용액(溶液)에 처리(處理)하였을 때 대두(大豆)나 녹두(綠豆)의 경우는 12시간(時間)이 경과하여도 원형질체(原形質體)의 나출(裸出)은 매우 불량(不良)했다. 2. 완두의 엽육조직체(葉肉組織體)로부터의 원형질체(原形質體) 나출(裸出)은 'Onozuka R-10' 및 'Macerozyme R-10'이 각각(各各) 2% 포함된 용액(溶液)으로 충분했으며, 처리시간(處理時間)은 4시간(時間)으로 족(足)했다. 3. 완두의 원형질체(原形質體) 나출(裸出)에 있어서는 효소(酵素)의 처리시(處理時) 명암(明暗)의 조건(條件)이 크게 작용하지 않았다. 4. 효소(酵素)의 처리시(處理時) $CaCl_2{\cdot}2H_2O$의 6mM 첨가에서 좋은 결과(結果)를 얻었다. 5. 나출(裸出)된 완두의 원형질체(原形質體)는 자연상태(自然狀態)에서 상호융합(相互融合)하기도 하였으며, B5 배지(培地)를 주축으로 하고 kinetin 2 mg/l 2,4-D 1mg/l가 첨가된 0.2% agar 배지(培地)에서 분열(分裂)하여 colony를 형성(形成)하였다. 6. Colony는 BII 배지(培地)의 다량원소(多量元素)와 amino acid, B5배지(培地)의 미량원소(未量元素)와 vitamine 및 kinetin과 NAA가 각각(各各) 2 mg/l로 조정된 0.2% agar 배지(培地)에서 callus로 되었다.