Lactobacillus casei YIT 9018 의 원형질체 생성과 재생에 관한 연구

A study on the protoplast formation and regeneration of Lactobacillus casei YIT 9018

Lactobacillus casei 균주의 protoplast 형성과 정상세포로의 재생에 관한 최적조건이 연구되었다. Lactobacilus casei 균주들은 sucrose 1 mole이 함유된 20mM potassium phosphate완충액 (pH6.8)에서 mutanolysin을 10 $\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ 농도로 처리하였을 때 용이하게 protoplast가 형성되었다. Protoplast의 최대형성은 균주가 0. 5%의 glycine이 함유된 TCM 배지에서 생장이 대수기 중기에서 말기에 도달된 세포를 수확하여 사용했을 때에 이루어졌다. 세포 재생은 6 mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$, 0.8 M sucrose 그리고 horse serum 10%가 함유한 재생 배지에서 효율적으로 이루어 졌다. Protoplast의 세포벽 재생 빈도는 3$0^{\circ}C$에서 3-4 일간 배양후 2-5% 범위로 나타났다.

Optimum conditions for the protoplast formation and regeneration of Lactobacillus casei have been searched for. L. casei cells were converted to protoplast by treating with 10$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ of mutanolysin in 20mM potassium phosphate buffer (pH6.8) containing 6mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$ and 1M sucrose. Maximum number of protoplasts was obtained when cells were taken from Tomochika's medium containing 0.5% glycine at the middle to late logarithmic growth phase. Regeneration was efficiently accomplished on the regeneration medium containing 6mM CaCl$_2$, 6mM MgCl$_2$, 0.8M sucrose and 10% of horse serum. The efficiently of the cell wall regeneration from protoplasts was 2-5% after 3-4 days of incubation at 3$0^{\circ}C$.