Isolation and Culture of Protoplasts of Brassica Plants

십자화과 식물의 나출원형질체의 단리와 그 배양에 관한 연구

The study was carried out to identify several factors affecting isolation and culture of cotyledone and leaf mesophyll protoplasts of cabbage (Brassica oleraceae), petsai (B.campestris subsp. pekinensis) and rape (B.napus). High viable protoplasts could be obtained when the cotyledon and the leaf mesophyll tissue of all species were treated with enzyme solution composed of 1% macerozyme 'R-10', 1.5% Onozuka 'R-10', 10% mannitol and 50,0 mM $CaCl_22H_2O$ for 4 hours. The protoplasts which obtained from the cotyledon of all species except the cabbage and the leaf mesophyll tissue of all species were divided on NN culture medium supplemented with 9.1% mannitol, 1% glucose, 1% sucrose, $1mg/{\ell}$ 2,4-D, $0.5mg/{\ell}$ NAA and $0.5mg/{\ell}$ BA. The division of the rape leaf mesophyll protoplasts were continued and led to colony.

십자화과 작물중 양배추, 배추 및 유채의 자엽과 엽육조직을 재료로 하여 원형질체 나출과 배양 실험을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 양배추, 배추 및 유채의 자엽과 엽육조직은 품종과 사용부위의 차이없이 공히 1 % Macerozyme 'R-10' 과 1.5% Onozuka 'R-10'이 포항된 E3 효소 용액에서 4 시간 처리하였을 때 우량한 원형질체를 나출할 수 있었다. 2. MS, B5 및 $GK_2$ 배지에서는 갈변현상이 관찰되어 세포분열 유기에는 적합하지 않았으며, NN 배지에서 갈변현상 없이 양호한 세포분열이 이루어졌다. 3. 배추와 유채의 자엽에서 단리한 원형질체는 9.1% D-mannitol, 1% glucose, 1% sucrose, $1mg/{\ell}$ 2,4-D, $0.5mg/{\ell}$ NAA 및 $0.5mg/{\ell}$ BA를 첨가한 NN배지에서 세포분열과 budding을 하였다. 4. 양배추, 배추 및 유채의 엽육조직에서 단리한 원형질체는 9.1% D-mannitol, 1% grucose, 1% sucrose, $1mg/{\ell}$ 2,4-D, $0.5mg/{\ell}$ NAA 및 $0.5mg/{\ell}$ BA를 첨가한 배지에서 세포분열과 budding을 하였고, 특히 유채의 나출원형질체는 cell cluster를 거쳐 colony까지 분화하였다.