A Study on the Characteristics and Purification of Bovine Milk Lipase by Affinity Chromatography

Affinity Chromatography에 의한 Milk Lipase의 분리정제와 특성조사

The lipolytic enzyme of milk from hormone treated and non treated cows was isolated and purified, It was shown that the crude lipase extract from the milk before and after a hormone treatment of the cows was different in color, foaming properties, yield and specific activity. Final purification of the lipase system was achieved by affinity chromatography on Heparin-Sepharose CL-6B. The lipase bound by Heparin-Sepharose was then characterised. The pH-optimum of the purified enzyme was 8.5 for butteroil emulsion as a substrate and the optimum temperature was $30^{\circ}C$ respectively. The molecular weight. determined by SDS-polyacrylamidegel electrophoresis, was about 70,000. The activity increased by 10% hen 0.01% bovine serum albumin was added to the substrate. The results indicate the enzymes obtained by affinity chromatography from milk before and after hormone treatment had the similar characteristics. The second lipolytic active component that was not bound by Heparin-Sepharose must be the cause of spontaneous rancidity.

우유의 지방분해 효소인 리파제를 분리 연구하기 위하여 홀몬처리 되지 않은 정상유와 홀몬 처리된 비정상유에서 리파제를 Heparin-Sepharose-CL-6B를 이용하여 분리 정제하였다. Heparin-Sepharose에 친화력을 조사한 결과 두 개의 효소활성이 있는 성분이 구분되었으며 한 성분은 Heparin-Sepharose-CL-6B에 결합되었고 다른 한 성분은 결합되지 않은 채 분리되었다. 친화성 크로마토그램에 결합되어 분리 정제된 리파제의 최적 온도, 최적 pH, 기질 특이성, 분자량 및 BSA의 활성제로서의 작용등 여러 가지 효소특성은 모두 동일한 것으로 나타났다. 그러나 홀몬처리된 소에서 얻은 우유의 경우에는 또 다른 호소활성 성분이 나타나 있음을 알았다. 이 lipolytic activity가 있는 성분은 Heparin-Sepharose-CL-6B에 친화력을 보이지 않았으므로 정상적인 milk lipase와는 구별된다. 따라서 홀몬처리된 소에서 얻은 우유에 함유된 성분중 Heparin-Sepharose에 결합된 효소는 유지방 자동산화에 영향을 끼치지 않으며 Heparin-Sepharose에 결합되자 않은 활성이 있는 성분은 자동산패에 영향을 크게 미친다고 볼 수 있다. 그 이유는 hormone의 불균형 상태로 인하여 생유에 자동산패가 일어날 수 있으며 이것은 비정상적으로 분비된 리파제 출현 사이에 연관관계가 있음을 의미한다.