Monoclonal Antibody와 Immunogold 표지법에 의한 Cryptosporidium의 Sporozoites와 Merozoites의 공통항원의 구조적 위치 결정

Ultrastructural Localization of a Common Antigen of Sporozoites and Merozoites of Cryptosporidium by Immunogold Labeling Technique Using a Monoclonal Antibody

Cryptosporidium이 인체 내에서 복잡한 life cycle를 거치면서 각 stage마다 만들어지는 단백질 항원의 관계성에 관한 보고가 없어 Cryptosporldiosis에 대한 치료제 개발에 어려움이 있었다. 본 연구는 단일군 항체와 Immunogold labeling 기술을 이용하여 주요 extracellular stages인 sporozoites와 merozoites의 antigenic relatedness를 살펴보았다. BALB/C 쥐로부터 merozoites에 대한 단일군 항체(Jo3)를 분리하였으며 IgG3형이었다. 정제된 sporozoites를 SDS-PAGE로 분리한 후 Western blot을 이용하여 Jo3를 반응시킨 결과 3,500Daltons 크기의 sporozoites 항원을 인식하였다. Jo3를 Cryptosporidium에 감염된 tissue section에 반응시킨 후 Immunoelectron microscopy를 이용하여 3.5-kDa 항원의 위치와 sporozoites와 merozoites가 똑같은 단백질 항원을 만드는가를 추적해 본 결과 3.5-kDa 단백질 항원이 두 stages에서 공동으로 합성되는 것으로 나타났으며 이 항원은 표면과 세포질 내에 위치하고 있었다.

Relatively little is known about the antigenic relatedness of the different developmental stages of Cryptosporidium. A monoclonal antibody (mAb), an IgG3, was produced against the Cryp-tosporidium merozoite stage by immunizing mice with merozoite preparation. This monoclonal was reacted with sporozoite antigens in Western blotting resulting in recognition of an epitope on a 3.5-kDa antigen. An immunoelectron microscopic technique was used to investigate the antigenic relatedness of Cryptosporidium Sporozoites and merozoites. Mouse intestine was fixed with 1 ％ glutaraldehyde and embedded in LR White. Thin sections were then sequentially treated with murine IgG3 mAb and anti-mouse IgG conjugated to 15-nm diameter colloidal gold. This mAb showed similar (sur-face/cytoplasmic) immunoelectron microsropic colloidal gold labeling patterns with sporozoites and merozoites, indicalting epitope sharing between these two stages. This information might be useful for identifying possible epitopes to which a vaccine could be developed.