Studies on Protoplast Formation and Regeneration of Coriolus versicolor

구름버섯의 원형질체(原形質體) 형성(形成)과 재생(再生)에 관한 연구(硏究)

To establish basic techniques for protoplast fusion of Coriolus versicolor several factors affecting protoplast formation and regeneration were investigated. Protoplast isolation was at maximum with 2.5-day cultured mycelia of C. versicolor treated with the combination of two enzymes, Novozym 234 (10 mg/ml) and cellulase Onozuka R-10 (15 mg/ml), for 3-4.5 hours at $30^{\circ}C.$ As an osmotic stabilizer for stabilizing the protoplast, 0.6 M sucrose was the best for formation and regeneration of the protoplast from the mycelia of the fungus and the regeneration frequency was 3.48%. Protoplast fusion was made by a modified method of Peberdy using PEG (M.W. 4,000). The fusion frequency between two mutants of C. versicolor was 1.86% and the fusion products showed differences in growth rate and colony morphology.

구름버섯은 항종양작용이 인정되었으며 근자에는 AIDS virus에 대한 억제효과가 보고되고 있다. 이와 같은 약효를 인정받고 있는 구름버섯 균주간의 세포융합이나 구름버섯과 타 유효한 버섯과 세포융합을 시행함으로써 더욱 효능이 우수하거나 다양한 균주의 약효를 한 균주내에서 기대할 수 있는 새로운 균주의 개발이 가능하다. 이러한 목적으로 구름버섯의 원형질체융합을 시행하기 위하여, 원형질체분리, 재생 및 두 영양요구주의 융합에 관하여 실험하였다. 균사체를 2.5일간 셀로판지위에서 배양하여 Novozym 234와 cellulase Onozuka R-10이 각각 15 mg/ml와 10 mg/ml 포함되어 있는 0.6M sucrose 용액에 넣어 $30^{\circ}C$에서 3-4.5시간 반응시킬 때 원형질체 수득률이 가장 높았다. 삼투압 안정제로 0.6M sucrose는 원형질체 형성과 재생에서 최적조건이었다. 0.6M sucrose를 포함하는 고체배지에서의 재생빈도는 3.48%이었으며 UV 조사시 생존률은 0.02-7.4%이었다. 원형질체융합은 $30^{\circ}C$에서 10분 동안 polyethylene glycol(M.W. 4,000)을 이용하여 시행하였는데 그 융합빈도는 1.86%이었다.