Characterization of Extracellular Proteolytic Enzyme of Isolated Psychrotrophic Bacteria from Cheddar Cheese

체다치즈에서 분리한 내냉성미생물의 단백질분해효소의 특성

Psychrotrophs producing protease were isolated during ripening periods of Cheddar cheese and one of them containing the highest protease activity was identified as Pseudomonas fluorescens 65. The extracelluar proteolytic enzyme was partially purified from P. fluorescens 65 through the Sephadex G-100 gel filtration. The protease was eluted between 190 ml and 230 ml of elution volume of sodium phosphate buffer. The purified protease showed a single band in SDS-PAGE and its molecular weight was 47,000. The composition of amino acid for the protease was determined and the most abundant amino acids were glutamic acid (14.96%) and serine (13.86%). The optimum temperature and pH for the activity was $45{\sim}50^{\circ}C$ and 6.0, respectively.

체다치즈 숙성기간 중 존재하는 저온성세균을 분리하여 단백질분해능이 우수한 균주를 선발하였고 이 선발된 균주가 생산하는 효소의 특성을 연구하였다. 체다치즈 숙성기간 중 미생물의 변화를 관찰한 결과 내냉성세균이 일정하게 유지되고 있었는데 그 중 200개의 균주를 1차 선발한 후 단백질분해능이 우수한 균주 3개를 분리, 동정한 결과 P. fluorescens 두 종과 A. denitrificans였다. 그 중 활력이 가장 높은 P. fluorescens 65가 생산하는 효소를 gel filtration에 의해 정제한 결과 $190{\sim}230ml$ elution volume에서 protease가 용출되었고 SDS-PAGE로 분석한 결과 분자량은 47,000인 것으로 나타났으며 아미노산 조성은 Glu(14.96%)와 Ser(13.83%)의 함량이 제일 높았고 Met, Trp은 존재하지 않았다. P. fluorescens 65의 성장곡선에 따른 효소활력을 실험한 결과 세포증식이 활발한 대수증식기에서 단백질분해효소를 많이 분비함이 나타났으며 pH는 변화가 없이 일정하였다. Extracellular protease 65의 반응 최적온도는 $45{\sim}50^{\circ}C$ 사이었으며 최적 pH는 6.0으로 나타났다.