초기 기관형성기중 랫트배자의 배양에 관한 연구

Culture of Rat Embryos During Early Organogenesis

포유동물의 최기형성을 연구하는데 가장 많이 사용되는 동물인 설치류중 랫트의 배자를 이용하여, egg-cylinder기를 지나 head-fold가 이루어지는 초기체절기인 9.5일경부터 뇌, 눈, 귀, 심혈관계가 형성되는 시기인 11,5일까지 2일(48시간) 동안, 체외에서 배양하였다. 그 배양의 최적조건은 실험실마다 다르기 때문에 최적조건확립을 목적으로 이 실험을 행하였다. 온도는 37$^{\circ}C$$\pm$0.2$^{\circ}C$로 유지시키고 가스는 배양초기인 9.5일~10.5일 동안을 50%$O_2$, 5% $CO_2$, 90% $N_2$가스를 공급하여 10.5일부터 6시간 동안은 20% $O_2$, 5% $CO_2$, 75% $N_2$로 하며 나머지 18시간 동안은 40% $O_2$, 5% $CO_2$, 55% $N_2$가스를 배양계에 공급했을 때 가장 좋은 결과가 나왔다. 배양배지로서는 랫트 IC 혈청을 분리하여 열비동화시켜서 사용하였다. 이종혈청이나 합성배지를 첨가해서 배양할 경우는 랫트 혈청에 비해 성장이 좋지 않은 것으로 관찰되었다. 동물실험법의 대체법으로서 배자배양법의 기본조건을 확립하여 최기형성 평가 방법으로서의 가능성을 제시하였다.

Rat embryos were cultured out of the mother from the head-fold stages, 9.5 days to 11.5 days during which they start to develop the brain, eyes, ears and cardiovascular system etc. We principally did the basic experiment in order to establish the best condition of the rat whole embryo culture in our laboratory. The temperature in the culture system was maintained 37$^{\circ}C$$\pm$0.2$^{\circ}C$ for 48 hrs. The culture was carried out in humidified atmosphere of the air, intially, the bottles were equilibrated with 5% $O_2$,5% $CO_2$, and 90% $N_2$gas mixture. After 22 or 24 and 29 or 30 hrs the cultures were reequilibrated with 20% $O_2$, 5% $CO_2$,75% $N_2$and 40% $O_2$, 5% $CO_2$, 55%$N_2$respectively. Various types of sera were tested and for the purpose of minimizing the quantity of rat serum, artificial medium was also tried and it was determined that rat serum supported normal growth over a period of 48 hrs, based on total growth analysis and structural comparisons with in vivo specimens.