Abstract
The extracellular endoinulase from Streptomyces sp. 556 was purified and characterized, The culture broth was fractionated by ammonium sulfate saturation followed by DEAE-cellulose column chromatography and 5ephadex G-200 gel filtration, The ultimately purified fraction revealed a single band in 7.5% polyacrylamide gel electropherogram. The purified enzyme showed the maximal activity at pH 5.5-6.0 and $50^{\circ}C$, but lost 93% of inulase activity after 30 min incubation at $55^{\circ}C$ . The essen.tial amino acid residue for catalytic activity appeared to be tryptophan. This endo inulase was activated by $Mn^{2+}$, whereas inactivated by $Ag^{+}$, $Hg^{+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{3+}$ and $Mo^{6+}$ EDTA and 8-hydroxyquinoline inhibited the enzyme so that the enzyme was considered to be a metalloenzyme. The Km value for inulin was 0.287 mM, and no invertase or $\alpha$-glucosidase activity was found in the enzyme.
Streptomyces sp. S56으로부터 endoinulase를 생산하고 정제하여 물화학적으로 성질을 조사하였다. 조효소는 DEAE-cellulose column chromatography 및 Sephadex G-200 gel filtration에 의하여 정제하였으며, 정제된 효소는 polyacrylamide gel 전기영동결과 단일 band로 나타나서 전기영동상 순수하게 분리되었다. 정제효소의 최적 pH는 5.5-6.0, 최적온도는 $50^{\circ}C$였으며, 최적 온도에서의 열안정성은 1시간 처리후 42%의 잔류활성을 보였다. 정제효소는 금속이온 중 $Mn^{2+}$에 의해서는 활성이 증가되었으나, $Ag^{+}$, $Hg^{+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{3+}$, $Mo^{6+}$ 에 의해서는 활성이 50% 이상 감소하였다. EH한 EDTA, 8-hydroxyquinoline에 의하여 활성이 저해되는 것으로 보아 metalloenzyme인 것으로 추정되었다. 본 효소는 inulin 내부의 $\beta$-2,1 결합을 가수분해하여 fructose oligomer를 생산하는 inulase 활성만을 가지고 있었으며 invertase 및 $\alpha$-glucosidase 활성은 나타내지 않았다. Inulin에 대한 Km값은 0.287mM, $V_{max}$ $0.109{\mu}mol/min$이었다. 효소의 촉매작용에 관하여는 amino acid residue는 tryptophan로 추정되었으며 그 외에 arginine, tyrosine, lysine, methionine, histidine, cysteine 및 cystine의 chemical modification 실험결과 효소활성저해가 나타나지 않아 이들 amino acid residue는 효소작용에 직접적으로 관여하지 않는 것으로 추정되며 carboxyl기도 효소활성에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
