Trypsins from the Dark Fleshed Fish(Anchovy, Mackerel, Yellowfin Tuna and Albacore) 1. Purification and Optimal Reaction Conditions

혈합육어(멸치, 고등어, 황다랭이 및 날개다랭이)의 Trypsin 1. 정제와 반응조건

  • 변재형 (부산수산대학교 식품영양학과) ;
  • 조득문 (동래여자전문대학 식품영양과) ;
  • 허민수 (통영수산전문대학 식품영양과)
  • Published : 1993.08.01

Abstract

Deterioration of fish muscle is known to occur more quickly in the dark fleshed fish than in the white fleshed fish, causing by their high intestinal proteolytic activity. Muscle degradation which suffer post-mortem autoproteolysis is affected by trypsin with its unique activation function towards other enzymes. To compare physicochemical and enzymatic properties for the trypsins of the dark fleshed fish, trypsins from the viscera of anchovy (Engraulis japonica), and the pyloric caeca of mackerel (Scomber japonicus), yellowfin tuna (Thunnus albacores) and albacore (Thunnus alalunga) were purified through ammonium sulfate fractionation, benzamidine-Sepharose 6B, DEAE-Sephadex A-50, and Sephadex G-75 chromatography Two trypsins from mackerel (designated mackerel trypsin A and mackerel trypsin B), and one each from anchovy, yellowfin tuna and albacore were isolated as electrophoretical homogeneity, The purities of anchovy trypsin, mackerel trypsin A and B, yellowfin tuna trypsin, and albacore trypsin increased to 78.1, 4.8, 9.3, 120, and 160-fold, respectively, compared to crude enzyme solutions. Molecular weights of the trypsins from the dark fleshed fish estimated by SDS-polyacrylamide electrophoresis were ranged from 22kDa to 26kDa. The trypsins contained higher amount of glycine, serine and aspartic acid, and less amount of tryptophan, methionine, lysine and tyrosine. Optimal conditions for amidotici reactions of the enzymes were pH 8.0 and 45$^{\circ}C$ for anchovy trypsin, pH 8.0 and 5$0^{\circ}C$ for mackerel trypsin A and B, pH 9.0 and 55$^{\circ}C$ for yellowfin tuna trypsin, and pH 9.0 and 5$0^{\circ}C$ for albacore trypsin. It was supposed that the habitat temperature of the dark fleshed fish is slightly connected with the optimal reaction temperature of the trypsins of the fish.

혈합육어 중 연근해 온대산 멸치의 내장과 고등어의 유문수, 그리고 원양 열대산 황다랭이 및 날개다랭이의 유문수를 각각 시료로 하여 trypsin을 분리 정제하였으며, 그 분자량과 아미노산 조성 및 효소의 반응 최적조건에 관하여 비교 분석하였다. 실험결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 멸치의 내장과 고등어, 황다랭이 및 날개다랭이의 유문수에서 각각 황산암모늄염석, benzamidine-Sepharose 6B 친화성 크로마토그래피, DEAE-Sephadex A-50 크로마토그래피, Sephadex G-75 겔 여과 크로마토그래피 등의 방법을 혼용하여 고등어로부터는 2종의 trypsin (고등어 trypsin A와 고등어 trypsin B로 명명함)을, 그리고 다른 어류로부터는 각각 1종의 trypsin을 분리 정제하였다. 2. 멸치 trypsin과 고등어 trypsin B는 고등어 trypsin A와 황다랭이 trypsin 및 날개다랭이 trypsin에 비하여 그 고유활성이 월등히 높았다. 3. 이들 혈합육어 trypsin의 분자량은 22kDa-26kDa 범위였다. 4. 이들 trypsin은 공통적으로 glycine, serine, aspartic acid를 많이 함유하고 있었으며, tryptophan, methionine, lysine, tyrosine의 함유량은 적었다. 5. BA-$\rho$-NA기질에 대한 반응 최적조건은 멸치 trypsin은 pH 8.0에서 45$^{\circ}C$, 고등어 trypsin A와 B는 pH 8.0에서 5$0^{\circ}C$, 그리고 황다랭이 trypsin은 PH 9.0에서 55$^{\circ}C$, 날개다랭이 trypsin은 pH 9.0에서 5$0^{\circ}C$였다. 6. 위에 든 실험 결과들은 혈합육 어류의 서식온도가 이들 어류의 trypsin의 반응 최적 온도와는 어느 정도 관계가 있을 것으로 추측되었다.

Keywords