Trypsins from the Dark Fleshed Fish(Anchovy, Mackerel, Yellowfin Tuna and Albacore) 2. Enzymatic Properties and Thermal Stabilities

혈합육어(멸치, 고등어, 활다랭이 및 날개다랭이)의 Trypsin 2. 성질과 열 안정성

In the present paper enzymatic properties of the trypsins from the four dark fleshed fish were compared with each other and thermal stabilities of the enzymes were also investigated. The trypsins from the dark fleshed fish showed their activity only in BA-p-NA substrate of the amide substrates such as BA-p-NA and SP-p-NA, and BAEE and TAME of the ester substrate such as ATEE, BAEE, BTEE, and TAME. The enzymes were strongly inhibited by the serine protease inhibitors such as antipain, leupeptin, TLCK, DFP and SBTI, and were also inhibited by such metal ions as Cu$^{2＋}$ and Hg$^{2＋}$, but fairly activated by $Mg^{2＋}$. Denaturation constants of the enzymes were 13.4$\times$10$^{-4}$ sec$^{-1}$ for anchovy trypsin, 47.18$\times$10$^{-4}$ sec$^{-1}$ for mackerel trypsin A, 34.06$\times$10$^{-4}$ sec$^{-1}$ mackerel trypsin B, 42.28$\times$10$^{-4}$ sec$^{-1}$ for yellowfin tuna trypsin and 16.6$\times$10$^{-4}$ sec$^{-1}$ for albacore trypsin at 55$^{\circ}C$. The activation energies of the trypsins at a temperature range of 3$0^{\circ}C$ to 5$0^{\circ}C$ were estimated to be 13.91 ㎉/mole for anchovy trypsin, 11.61㎉/mo1e and 8.43㎉/mole for mackerel trypsin A and for mackerel typsin B, 4.35㎉/mole for yellowfin tuna trypsin, and 3.76㎉/mole for albacore trypsin.

전보에 이어, 정제한 혈합육어 trypsin에 대하여 효소적 성질 및 열 역학적 성질에 관하여 비교 검토한 내용을 요약하면 다음과 같다. 이들 혈합육어 trypsin은 BA-p-NA와 SP-p-NA 같은 amide기질 중 BA-p-NA기질만에 대하여, 그리고 ATEE, BAEE, BTEE 및 TAME 등의 ester 기질 중에서는 BAEE와 TAME에 대하여만 현저한 활성을 보였다. 이들 효소는 antipain, leupeptin, DFP, TLCK, SBTI 등 화학약제와 금속이온 Cu$^{2＋}$ 및 Hg$^{2＋}$에 의하여서는 그 활성이 현저히 저해를 받았으나, $Mg^{2＋}$에 의하여서는 부활하였다. 이 효소들은 모두 5$0^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 불안정하였으며, 날개다랭이의 trypsin이 온도 변화에 대하여 가장 안정하였다. 그리고, 활성화에너지는 멸치 trypsin이 13.91㎉/mo1e, 고등어 trypsin A는 11.61㎉/ mole, 고등어 trypsin B는 8.43㎉/mo1e, 황다랭이 trypsin은 4.35㎉/mole, 그리고 날개다랭이 trypsin은 3.76㎉/mole 이었다.