Chaperon Effects of Campylobacter jejuni groEL Genes Products in Escherichia coli

Campylobacter jejuni의 groEL 유전자 산물의 대장균에서의 Chaperon효과

The cells of Campylobacter jejuni heat-shocked at 48${\circ}C$ for 30 min synthesized the heat shock proteins of HSP90, HSP66 and HSP60. Those heat shock proteins were found to correspond to the heat shock proteins of HSP87, HSP66 (DnaK), and HSP58 (GroEL) of E. coli, respectively. By Southern blot analysis of the chromosomal DNAs of C. jejuni with groESL and dnaK genes of E. coli as DNA probes, the heat shock genes of C. jejuni which are homologous to the E. coli groESL and dnaK genes were found to exist in the chromosomal DNA. The genomic libraries of C. jejuni were constructed with the cosmid vector pWE15 and the groEL gene of C. jejuni were cloned in E. coli B178 groEL44 temperature senstive mutant. The hybrid plasmid (pLC1) was inserted with the DNA fragment (about 5.7kb in size) containing the groEL gene. E. coli groEL44 mutant cell transformed with the pLC1 could grow at 42${\circ}C$ by synthesizing the HSP60 of C. jejuni and regained the susceptibility to the ${\lambda}$ vir phage by expression of the groEL gene in the cloned cells. These indicated that the groEL products of C. jejuni had chaperon effects by synthesizing the heat shock proteins in the cloned cells of E. coli.

Campylobacter jejuni에 48${\circ}C$의 열충격을 30분간 주었을 때, HSP90, HSP66, HSP60의 열충격 단백질들이 합성되었고, 이 단백질들은 각각 E. coli의 hsp87, HSP66 (DnaK), HSP58(GroEL)에 상응하는 단백질들이었다. 여러가지의 제한효소로 처리한 C. jejuni의 chromosomal DNA에 E. coli의 groEL(4.0kb)을 probe로 사용하여 Southern hybridization한 결과, 이들과 상동성을 가지는 유전자들이 있음을 확인하였다. C. jejuni의 groEL 유전자를 pWE15 cosmid를 이용하여 recombinant plasmid pLC1을 만들고, 이를 E. coli B178 groEL44 ts mutant에 형질전환시켜 E. coli LC1을 얻었다. 이 pLC1에는 groEL 유전자가 존재하는 5.7kb인 insert DNA가 포함되어 있었고, 그로부터 subcloning한 pLC101에는 groEL을 포함하는 4.0kb의 DNA가 삽입되어 있었다. 이 recombinant plasmid들이 형질전환된 E. coli LC1과 LC101 균주에서는 C. jejuni의 GroEL 단백질이 과다 생산되었다. C. jejuni의 groEL이 cloning된 E. coli LC1은 42${\circ}C$에서의 생장능력이 회복되었고, ${\lambda}$ vir phage에 대한 감수성도 회복되는 등의 chaperon 효과가 입증되었다.