초록
본인 등은 참개구리를 이용하여 여포의 스테로이드 생성에 관한 two-cell type model을 제시한바 있다. 본 연구에서는 이 model이 북방산 개구리 (R. dybowskii)에도 적용 되는지와 협막세포층에 minor pathway(P 5$\longrightarrow$17$\alpha$-OHP$_4$)가 있는지의 여부를 조사하였다. 이를 위하여 북방산 개구리 난소로부터 intact follicles (IFs), granulosa cell enclosed-oocytes (GcEOs), theca/epithelium (THEP) layers 및 난구세포가 포함되어 있지 않은 순수한 theca/epithelium (P-THEP) layers를 미세해부기술로 분리해 내었다. 이들 여포 조직들은 전구 스테로이드나 개구리 뇌ㅏ수체추출물(FPH)이 포함되어 있는 배양액에서 6시간 배양한 후, 각 여포조직 의해 전환된 산물스테로이드의 양을 방사면역측정법으로 조사하였다.외부에서 첨가된 P 5와 P$_4$는 GcEOs와 IFs에 의하여 효율적으로 P$_4$혹은 17 $\alpha$-OHP$_4$로 전환되었으나 THEP에 의해서는 전환되지 않았다. 더욱이 순수한 협막층(P-THEP)에 의해서는 전환이 거의 이루어지지 않았다. 17 $\alpha$-OHP$_4$및 testosterone 역시 GCEOs와 IFs에 의해서 estradiol (E$_2$) 및 androstenedione (AD)으로 각각 전환되었으나 THEP에 위해서는 정환되지 않았다. 반면에, AD는 THEP과 IFs에 의해서만 T로 전환되어졌으며, AD를 제외한 다른 전구스테로이드들은 THEP 의해서도 T로 전환되지 못했다. 이러한 결과들은 P$_4$, 17 $\alpha$-OHP$_4$AD 및 E$_2$는 주로 난구세포에서 생성되고, T는 주로 협막세포에서 생성되며 T나 E$_2$의 효율적인 생성에 이들 두 세포의 협조가 필요하다는 것을 말해준다. 이는 참개구리에서 제시한 two-cell type model이 북방산개구리 여포의 스테로이드 생성과정에도 적용되며 협막 세포층에는 minor pathway ( P5 to 17$\alpha$-OHP$_4$)가 존재하지 않음을 또한 보여주고 있다.
Previously, we have proposed a two-cell type model for follicular steroidogenesis inamphibians with Rana nigromacu lota. Present experiments were carried out to ascertain whether the model Is applicable to R. dybowskii. The role of theca layer were also reassessed by using granulosa cell-free pure theca layer (P-THEP). Theca/epithelium (THEP) layers, P-THEP layers, and granulosa cell enclosed-oocytes () were obtained from ovarian follicles of R. dybowskii by microdissection. Intact follicles (IFs) and different types of tissues were cultured for 6 hour in amphibian Ringer's m the presence or absence of FPII (0.05 gland/mi) or various steroid precursor (100 ng/ml). The amounts of product steroids converted by the components were measured by RIA. Exogenously added pregnenolone (P5) resulted in a marked increase in progesterone (P$_4$) by GCEOs (2143 pg/follicle) and IFs (2346 pg/follicle) but a smaller increase in P4 by THEP layer (495 pg/follicle). Addition of P$_4$ increased 17 a-hydroxyprogesterone (17 $\alpha$-OHP$_4$) levels by GCEOs (1118 pg/follicle) and IFs (1333 pg/follicle) but less by THEP layer (290 pg/follicle). However, much less amounts of P$_4$ or 17 $\alpha$-OHP$_4$ were producad by P-THEP layers than THEP in the presence of P5. Exogenous 1 7$\alpha$-OIIP$_4$ increased androstenedione (AD) levels by GCEOs (1415 pg/follicle) and IFs (561 pg/follicle) but not by THEP layers. In contrast, addition of AD resulted m a marked increase in testosterone (T) levels by TIIEP (2594 pg/follicle) and IFs (2223 pg/follide) but much less by GCEOs (339 pg/follicle). Exogenous T increased estradiol (E$_2$) levels by GCEOs (551pg/follicle) and IFs (887 pg/follicle), but not by THEP layer (<10 pg/follicle). Without addition of FPH or steroid precursors, very low or nondetectable levels of steroids were produced (< 20 pg/follicle) by all the types of follicular components examined. The data presented here indicate that the two-cell type model based on the study with R. nigromacu Iota is applicable to R. dybowskii and also suggest that the minor pathway, which convert P5 to 17$\alpha$-OHP$_4$, is not present in theca layer.
