Abstract
Myrosinase was purified from Korean mustard seed(Brassica juncea) by a sequential process of DEAE-cellulose, concanavalin A-sepharose, and Superose 6 chromatography. The molecular weight of puri-fied myrosinase(II-2) determined by SDS-polyacrylamide electrophoresis was 67KD. About a 248-fold purification for myrosinase II-2 was obtained after Superose 6 chromatography. Optimum pH of the myrosinase was 7.0 and optimum temperature of the enzyme was $3^{\circ}C.$ The enzyme was stable at pH 7.0, and below $30^{\circ}C.$ Cu, Hg and Fe ion significantly inhibited the enzyme activity, but ascorbic acid enhanced, resulting in a maximum activity by 1mM ascorbic acid. Among tile ascorbic acid ana-logues, dehydroascorbic acid inhibited the enzyme activity, whereas others showed a little effect. Reducing agents such as 2-mercaptoethanol and dithiothreitol inhibited the enzyme activity, but the reducing agents with ascorbic acid was enhanced enzyme activity.
한국산 겨자에서 myrosinase를 분리 및 정제하고, 이들의 효소학적 특성을 조사한 결과는 다음과 같다. 겨자 myrosinase를 DEAE-cellulose, Concanavalin A-Sepharose 및 FPLC Soporose 6 칼럼을 이용하여 분리 및 정제하였을 때 적어도 3개의 이성효소가 존재하는 것으로 나타났으며, Myrosinase II-2의 최종 비활성도는 57.lunits/mg, 정제도는 약 248배였다. SDS-PAGE상에서 myrosinase(II-2)의 단일밴드를 확인한 결과, 그 분자량은 약 67KD로 추정 되었다. 최적 pH는 phosphate 및 Tris-HCI 완충액에서 7.0이 가장 활성이 높았고, 그 효소는 pH 7.0에서 안정하였으며, 최적 활성을 나타내는 온도는 $37^{\circ}C$ 부근이었고, $40^{\circ}C$ 이상에서는 비교적 불안정하게 나타났다. Ascorbic acid의 영향은 1mM에서 가장 안정하였으며, 그 이상의 농도에서는 변화가 없었다. 망간과 마그네슘 및 나트륨은 효소활성을 촉진시키는 것으로 나타났으며 구리, 수은 및 철 이온은 약간 저해하였다. Ascorbic acid analogue 중 dehydroascorbic acid는 효소 활성을 저해하였으며, 나머지 것들은 거의 영향을 미치지 않았다. 2-Mer-captoethanol과 dithiothreitol과 같은 환원제는 효소활성을 억제하였으나 이들과 ascorbic acid를 함께 첨가 하였을 때는 활성이 다소 증가하였다.
