Korean Journal of Food Science and Technology (한국식품과학회지)

Korean Society of Food Science and Technology (한국식품과학회)
권호 표지

Application of FMOC-Cl for the Quantitative Determination of N-linked Oligosaccharides

FMOC 표식에 의한 Sugar Chain의 분석

  • Kim, Dong-Hyun (Department of Agriculture Science, Tokyo University of Agriculture and Technology) ;
  • Hwangbo, Sik (Department of Animal Science, Sangji University) ;
  • Chung, Gu-Yong (Department of Animal Science, Sangji University)
  • 김동현 (일본동경농공대학) ;
  • 황보식 (상지대학교 생명자원과학대학) ;
  • 정구용 (상지대학교 생명자원과학대학)
  • Published : 1997.08.01
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Abstract

A fluorescence tagging agent, FMOC-Cl (9-fluorenylmethyl chloroformate) was used for the determination of 1-amino-oligosaccharide intermediates generated from glycoproteins by peptide-N $(N-acetyl-{\beta}-D-glucosaminyl)$ asparagine amidase (N-Glycanase, PNGase F). The derivatives were separated on an Amido 80 column by HPLC using a gradient system with 25 to 51% aqueous acetonitrile and monitored by a fluorometric detector. The detection limit of FMOC-amino-oligosaccharides was $0.05{\sim}1.5$ pmol with fluorometric detection at 278 nm.

N-glycanase처리에 의해 얻어진 1-amino-oligosaccharide를 FMOC-Cl로 표식 하는 방법을 확립하였다. 이 방법에 의해 얻어진 FMOC-표식 oligosaccharides는 기존의 방법보다 약 4배의 감도를 나타내었다. Amido 80 column을 사용한 분석에 의하여, Man 5-9 GlcNAc 2 amines의 5개의 성분은 각각 분리되어 용출 되었으며, 회수율은 기존의 방법과 거의 같았다. 1-amino-oligosaccharides는 0.05 pmol에서 1.5 pmol 사이에서 직선적인 관계를 나타내었으며, 2-aminopyridine에 의한 표식과 비교하였을 때, 안정된 화합물을 형성하고 있으며, 감도가 높아 미량의 oligosaccharides의 분석에 매우 적합한 것이 확인되었다.

Keywords