Abstract
The study was carried out to investigate the antioxidant effects of ethanol, methanol, and water extracts or fractions of ethanol extract of Ligularia fischeri on low density lipoprotein(LDL) and ethanol extract was further fractionated. The methanol extract and ethyl acetate fraction showed strong antioxidant effect with 71.7% (13.36 nmol/mg) and 95% (1.35 nmol/mg) inhibition in the presence of $15\;{\mu}g/mL$, respectively. In the value of malondialdehyde(MDA) with oxidation time, ethanol, methanol and water extract in the presence of $25\;{\mu}g/mL$ inhibited the oxidation up to 4h incubation and ethyl acetate fraction showed strong antioxidant effect up to 8h incubation. Also, the ethanol, methanol and water extract showed antioxidant effects in the agarose gel electrophoresis test. The conjugated diene formation by lipid oxidation with addition of $Cu^{2+}$ in the Ligularia fischeri extracts and their fractions was decreased approximately 1.1 to 2.8 times and 2.2 to 3.2 times, respectively compared to control. In the degradation of apo B-100 by oxidation using SDS-PAGE, ethanol, methanol and water extract showed similar degradation band pattern compared to that of native LDL band. Apo B-100 contents using densitometer were 77.8, 92.5% and 82.3% in the ethanol, methanol and water extract, respectively, compared to 100% of native LDL. In the meanwhile, apo B-100 contents in hexane, ethyl acetate and water fraction were 38.8, 94.5 and 65.5% respectively. This results indicated that ethyl acetate fraction showed the strongest antioxidant effect on MDA value or apo B-100 contents of LDL.
지질 산화에 의해 생성하는 MDA (malondialdehyde)를 thiobarbituric acid와 반응시켜 측정한 MDA 값은 곰취 추출물의 농도가 증가함에 따라 감소하므로서 추출물들에 의해 산화가 억제됨을 알 수 있었다. 메탄올 추출물의 경우 $15\;{\mu}g/mL$농도로 첨가시 71.7% (13.36 nmol/㎎)의 산화억제율을 나타내었으며 분획물의 경우 ethyl acetate 분획물이 동일농도에서 97% (1.35 nmol/mg)의 억제율을 나타내었다. 산화시간에 따른 MDA 값의 변화는 $25\;{\mu}g/mL$의 농도를 첨가시 에탄올, 메탄올 및 물 추출물의 경우 4시간까지 산화를 억제하였으며 분획물의 경우에는 $20\;{\mu}g/mL$의 농도를 첨가시 ethyl acetate 분획물이 8시간까지 강한 항산화효과를 나타내었다. Agarose gel electrophoresis에서는 에탄올, 메탄올 그리고 물 추출물 모두 항산화 효과가 인정되었다. 지질산화에 의해 생성되는 conjugated diene은 곰취 추출물의 경우 $Cu^{2+}$로 산화시켰을 때 대조에 비해 약 1.1배에서 2.8배까지 감소시키는 효과를 나타내었고 분획물의 경우 약 2.2배에서 3.2배까지의 감소효과를 나타냄으로서 강한 산화 억제효과를 나타내었다. SDS-PAGE를 이용하여 LDL내부에 존재하는 apo B-100부분에 대하여 산화에 따른 분해정도를 측정한 결과 에탄올, 메탄올 및 물 추출물이 천연 LDL의 band와 유사한 band를 나타내었다. Densitometer를 이용한 apo B-100함량은 천연 LDL의 함량을 100%로 하였을 때 에탄올, 메탄올 및 물 추출물의 경우 각각 77.8, 92.5 그리고 82.3%의 함량을 나타내었다. 분획물의 경우 헥산, ethyl acetate 및 물 분획물에서 각각 38.8, 94.5% 그리고 65.5%의 함량을 나타냄으로서 ethyl acetate 분획물이 강하게 산화를 억제함으로서 apo B-100의 분해를 막아주고 있음을 알 수 있었다.