Specific Detection of Listeria monocytogenes in Foods by a Polymerase Chain Reaction

PCR에 의한 식품으로부터 Listeria monocytogenes의 특이적 검출

The polymerase chain reaction (PCR) for the sensitive and specific detection of Listeria monocytogenes was employed by using LM 1 and LM 2 primers which were based on the listeriolysin O gene. The direct use of cell suspension as DNA template, without DNA extraction or lysis step, was suitable and specific enough to detect L. monocytogenes at the level of $10^2$ CFU or less per PCR for the pure culture and milk sample, however, the detection sensitivity became blunt for other food samples such as kimchi and chicken. The nested PCR, in which L-1 and L-2 (both designed from listeriolysin O gene) were employed as inner primers, was specific for detecting L. monocytogenes and enhanced the detection limit by 10 times. The PCR using LM 1 and LM 2 primers was very effective to detect L. monocytogenes from foods in terms of the specificity and time consumed, i. e. within $4{\sim}8\;hrs$ (nested PCR).

Listeria monocytogenes의 식품 속에서 신속하고 특이적인 검출을 위하여, listeriolysin O gene에 의한 primer, LM 1과 LM 2를 선택하여 PCR을 수행하였다. L. monocytogenes의 DNA 추출이나 cell lysis 없이 intact whole cell을 직접 이용하여 PCR을 하였으며 $10^{2-6}$ CFU 수준의 균체 배양액으로부터 L. monocytogenes에 특이적인 702 bp의 PCR 증폭 산물을 확인하였다. 우유, 닭고기, 김치 등의 식품에 L. monocytogenes를 접종하여 증균배양 전후 균의 PCR에 대한 감도와 생균수를 비교한 결과, 실험된 식품 속에서의 L. monocytogenes의 검출 감도는 순수 배양액에서의 경우에 비해 약 1/10로 둔화되었으나 역시 특이적인 검출이 가능하였다. Primer LM 1과 2를 이용한 본 실험조건에서의 L. monocytogenes의 PCR에 의한 검출은 약 4시간으로 확인이 가능하였으며, 기존의 배양 방법에 비해, 특이성이나 검출 속도 면에서 식품위생 실무에 적용하기 위한 높은 잠재력을 보여 주었다.