Korean Journal of Microbiology (미생물학회지)

The Microbiological Society of Korea (한국미생물학회)
권호 표지

Pulsed-Field Gel Electrophoresis and Monoclonal Antibody Analysis of Leptospira interrogans Isolated in Korea

국내 분리 렙토스피라균의 단클론 항체 및 Genomic DNA의 Pulsed-Field Gel Electrophoresis 분석

  • 조민기 (한림대 의과대학 미생물학교실) ;
  • 기선호 (한림대 의과대학 미생물학교실) ;
  • 김형준 (한림대 의과대학 미생물학교실) ;
  • 김윤원 (한림대 의과대학 미생물학교실) ;
  • 장우현 (한림대 의과대학 미생물학교실) ;
  • 오희복 (국립보건원 세포질환부)
  • Published : 1999.09.01
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Abstract

A total of 22 Leptospiua inlermgans field isolates from the ~ a t s captured in 5 provinces of Korea in 1996, and 6 antigenically closely related relerence serovars of lai, yeonchon, birkini. gem, mwogolo. and canicola were analysed. When the antigenic characteristics were analysed by reactivity with 7 monoclonal antibodies prepared with sh.ains belongng to serogroup Icterohaemorrhagiae. all 22 isolates showed the same reaction pattern with that of serovar lai. Large restriction fragment patterns obtained after cleavage of geno~nic DNAs with infrequently cuttimg restriction enzymes were analyzed by pulsed-field pel electrophoresis(PFGE). Identification of leptospira strains by PFGE with Nor I, Asc I or Iise I digests correlated with their antigenically typed serovars, silh a few exceptions. PFGE of isolates, except for JR89, digested wjth Nor I showed identical pattern w~th serovar lai, showing 13 Cragments between 940 kb and 63 kb. When PFGE pallerns of JR89 were compared with those of serovar lai, Not I digest showed additional two hands of 1000 kb and 460 kb, while Asc I digest showed 650 kb fragment and Fse I digest did not show the fragment of 280 kb. Whereas serovar yeonchon. which was isolated in Korea and identified as a new serovar previously. could be differentiated from serovar lai in antigenic reactivities with monoclonal antibodres. it showed the similar PFGE pattern with serovar lai includin~ reference and field isolates. It was suggested that Korean leptospiral field isolates are closely related in DNA level.

1996년 경기도, 강원도 충청북도, 전라남도, 전라북도 등 일부지역에서 채집된 들쥐들로부터 분리된 22주의 렙토스피라균의 단클론 항체에 대한 반응양상 및 genomic DNA 의 pulsed-field gel electrophoresis pattern을 분석하였다. 혈청군 Icterohemorrhagiae 내의 균주로 면역하여 제조한 7가지 단클론 항체에 대한 분리균주들의 반응은 모두 혈청형 lai 와 같은 pattern을 보였다. Not I 제한효소 절단 DNA 의 PFGE에서 JR34, JR57, JR77, JT82, JR86, JR109, NR4, NR6, NR13, CR3, KR48, NR2, NR8, NR9, NR10, NR11, NR12, JR58, 및 JR62 주 들은 모두 혈청형 lai 와 유사한 profile을 보였으며 940 kb와 63kb 사이에 13개의 절편 band를 보였다. JR89주는 혈청형 lai 및 다른 분리균주에서 관찰되지 않은 1000 kb band 와 460 kb band 가 관찰되었다.표준균주 혈청형 lai, birkini, gem, mwogolo, canicola 등은 각기 완전히 다른 pattern을 보였으며 혈청형 yeonchon 은 lai 와 같은 pattern을 보였다. UPGMA방법에 의한 dendrogram 분석결과 분리주는 lai 및 yeonchon 혈청형과 81~85%, 기타 혈청형과는 62% 이하의 유사도를 나타내어 항원분석법에 의한 혈청형 동정결과와 일치하였다. Asc I 제한요소 절단 DNA 의 PFGE에서는 JR34, JR77, JR82, JR109, NR6, NR13, CR3, KR48, 및 JR57, JR58, JR62, JR86, NR2, NR3, NR4, NR8, NR9, NR10, NR11, NR12 주들은 모두 1900 kb 에서부터 380kb 사이에 3개의 절편 band를 보였으며 이는 표준균주 lai 와 같은 pattern 이었다. JR89주는 다른 분리균주와는 달리 1640 kb 대신 650kb 의 band를 보였다. Fse I 제한효소 절단 PFGE 에서는 JR57, JR77, JR82, JR86, JR109, NR4, NR6, NR13, CR3, KR48주 및 JR34, NR2, NR3, NR9, NR10 주들은 모두 1900 kb 와 280kb 사이에 5개의 절편 band를 보였으며 이는 표준균주 lai 및 yeonchon 과 같은 pattern 이었다. 그러나 JR89주에서는 280kb 가 나타나지 않아 다른 분리균주와 구분되었다.

Keywords

References

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