Analytical Science and Technology (분석과학)

The Korean Society of Analytical Sciences (한국분석과학회)
권호 표지

Determination of Glutathione in Biological Samples by Ion-pairing HPLC/FLD

이온쌍 HPLC/FLD를 이용한 생체 시료중의 Glutathione 농도 분석

  • Yoo, Jeong-Yeon (Seoul Medical Science Institute, Seoul Clinical Laboratories(SCL)) ;
  • Lee, Kyoung-Ok (Seoul Medical Science Institute, Seoul Clinical Laboratories(SCL)) ;
  • Shin, Ho-Sang (Department of Environmental Education, Kongju University)
  • 유정연 (서울의과학연구소 서울임상병리검사센터(SCL)) ;
  • 이경옥 (서울의과학연구소 서울임상병리검사센터(SCL)) ;
  • 신호상 (공주대학교 환경교육학과)
  • Received : 1998.10.14
  • Published : 1999.02.25
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Abstract

Glutathione(GSH) in biological samples was determined by high performance liquid chromatographic(HPLC) method with fluorescence detector(FLD) after monobromobimane(MBB) or 4-fluoro-7-sulfobenzofurazan(SBD-F) derivatization. The detection limit of $0.03{\mu}g/mL$ was obtained after MBB derivatization, derivative of MBB was about 200 times more sensitive than that of SBD-F. N-acetylcysteine was used as internal standard and tetrabutylammonium ion as counter ion for better separation. The determination by ion-pairing chromatography after MBB derivatization was characterized by linearity in the range between $0.08{\sim}8.33{\mu}g/mL$ with a good correlation coefficient of 0.998. By precision test appeared relative standard deviation at less than 5% at three different concentrations. This method can be used for the analysis of GSH in plasma and tissue.

생체 시료내의 glutathione(GSH)을 monobromobimane(MBB)이나 4-fluoro-7-sulfobenzofurazan(SBD-F)으로 최적 유도체화 조건을 확립하였고 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)/형광 검출기(FLD)를 사용하여 정량분석 하였다. MBB로 유도체화한 경우에는 검출한계가 $0.03{\mu}g/mL$으로서 SBD-F를 사용한 경우보다 감도가 약 200배 정도 향상되었다. 이때 내부표준물질로서 N-acetylcysteine을 사용하였으며, MBB 유도체의 분리능을 개선시키기 위해 tetrabutylammonium 이온을 counter 이온으로 선택하였다. 위의 조건의 이온쌍 크로마토그래피를 이용하여 분석한 결과 $0.08{\sim}8.33{\mu}g/mL$ 농도 범위에서 상관계수가 0.998 이상으로 좋은 직선성을 보여주고 있다. 재현성을 조사한 결과 세 가지 다른 농도에서 상대 표준 편차가 5% 이내로 나타났다. 이 방법은 혈장, 조직 등의 생체 시료중 GSH의 분석법으로 적합하다는 것을 확인하였다.

Keywords

Acknowledgement

Supported by : 보건복지부

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