Purification and Characterization of Lysyl Oxidase from Fetal Bovine Aorta in the presence of protease inhibitors -Evidence against polymorphism-

소(牛) 태아(胎兒) 대동맥(大動脈)으로부터 단백 분해효소 억제제 존제 하에 Lysyl Oxidase의 순수분리(純棒分離) -다양성(多形性)에 대(對)한 반론(反論)-

Lysyl Oxidase from fetal bovine aorta was purified to homogenity using extraction, Sephacryl S200HR chromatography, Hydropore AX ion-exchange high performance liquid column chromatography, Cibacron blue affinity chromatography, and Sephacryl S-300 HR chromatography in the presence of protease inhibitor. The purified enzyme was active toward lathyritic collagen as well as elastin and was sensitive to aminonitriles such as BAPN. Upon Sephacryl S-300 HR chromatography, the enzyme was eluted as a peak with a $K_{av}$ value of 0.45 (65% of $V_t$ ) and it eluted from high performance liquid ion-exchange column (Hydropore |AX) at single position (ionic strength, I = 0.1~0.15). Once purified, it showed one band upon SDS-PAGE. It migrated to a band the mobility of which corresponded to a Mr of 33,500 upon reduction while it migrated to a 24,500 Mr position under the non-reducing condition. In constrast to other reports, it is concluded that fetal bovine aorta contains only one type of lysy oxidase.

소(牛) 태아 대동맥으로 부터 Urea 추출, Sephacryl S200 HR 크로마토그라피, Cibacron blue-agarose 친화 크로마토그라피, 그리고 Sephacryl S300 HR 크로마토그라피를 이용하여 lysyl oxidase를 순수분리를 하였고 분리가간 중 항상 단백분해 억제제를 첨가하였다. 순수 분리된 효소는 가교결합이 없는 교원단백질과 엘라스틴에 활성을 보였고, BAPN 같은 아미노나이트릴에 의하여 억제되였다. Sephacryl S300 HR 크로마토그라피로 분리 될 경우, 이 효소는 0.45의 $K_{av}$ ($V_t$의 65%)값을 보였고, 이온교환 고속액체 크로마토그라피의 경우에서는 이온 강도가 0.1-0.15 사이에서 하나의 피크로 용리되었다. 순수 분리된 이 효소는 SDS 폴리아크릴아마이드 전기영동에서는 하나의 밴드로 이동하였는데, 환원이 될 경우에는 분자량이 33,500, 비환원이 될 경우에는 분자량이 24,500의 위치로 이동하였다. 이온교환 고속액체 크로마토그라피의 결과를 참조하여, 다른 보고서와는 달리 소(牛) 태아(服兒) 대동맥(大動服)에는 여러 종류가 아닌 한 종류의 lysyl oxidase가 존재한다고 결론을 내렸다.