Application and High Throughput Screening of DPPH Free Radical Scavenging Activity by Using 96-Well Plate

96-well plate를 이용한 DPPH free radical 소거활성 측정과 그 응용

A 96-well plate was applied to determine the DPPH free radical scavenging activity using 107 plant-specific enzyme inhibitors and 100 unknown plant-originated extracts. The final optimum volume was $250{\mu}L$ containing $100{\mu}M$ DPPH ethanolic solution at pH 7.8. In this condition, the radical scavenging activities were significantly increased by two known antioxidants consisting of ascorbate and a-tocopherol in a concentration-dependent manner. Among the 107 inhibitors, ampicillin and gallic acid showed 90.2% and 92.6% antioxidant activity at $100{\mu}M$, respectively, and these results were consisted with previous findings. In the tested 100 natural materials at $50{\mu}g/mL$, antioxidant activity of AT-407 resulted in the highest of 90.1%, and 10 extracts including AT-388 and AT-443 showed over 70%. Our results suggest that the use of 96-well plate for determining DPPH free radical scavenging activity would be a suitable method to select antioxidant-like substances of both synthetic compounds and natural products.

96-well plate를 사용해서 DPPH free radical 소거활성의 고효율검정 (high throughput screening)방법을 확립하였고, 이 방법을 이용하여 107개의 식물특정 효소저해제와 다양한 식물 추출물의 항산화활성을 조사하였다. DPPH free radical 소거활성 측정 측정을 위한 적정 시험조건은 총 반응액이 $250{\mu}L$일 경우 $100{\mu}M$의 DPPH(pH 7.8), 20 분의 반응시간이었고, 이 조건하에서 ascorbate와 a-tocopherol 은 농도 의존적인 항산화활성을 나타내었다. 107개의 식물 특정효소저해제 중에서 11개의 화학물질이 $100{\mu}M$ 농도에서 70% 이상의 항산화활성이 있었는데, 특히 ampicillin과 gallic acid는 각각 90.2% 와 92.6% 의 나타냈다. 또한 100개의 식물 추출물은 $50{\mu}g/mL$ 농도에서 70% 이상의 활성을 보이는 추출물이 11개이었는데, 그 중에서 AT-407의 활성이 90.1%로 가장 높게 나타났다. 따라서 96-well plate를 이용한 DPPH free ra 이때 소거활성 측정방법은 여러가지 합성물질이나 다양한 천연물질에 대하여 보다 간편하고 신속하게 항산화활성을 측정할 수 있을 것으로 사료되었다.