Antigenic domain of jai or surface protein (p30) of Toxoplosmc Sondii was analyzed after polymerase chain reaction (PCR) of its gene fragments. Hydrophilic or hydrophobic moiety of amino acid sequences were expressed as glutathione S-transferase (G57) fusion proteins. Fragments of p30 gene were as follows: 737, total p30 open reading frame (ORF) ; S28, total ORF excluding N-terminal signal sequence and C-terminal hydrophobic sequence; Al9, N-terminal 2/3 parts of A28; A19, N-terminal 2/3 of S28; P9, C-terminal 2/3 part of S28; Z9. middle 1/3 of S28; and 29, C-terminal 1/3 of S28. respectively. Primer of each fragment was synthesized to include clamp sequence of EcoR I restriction site. PCR amplified DNA was inserted info GST (26 kDa) expression vector, PGEX-47-1 to transform into Escheri,hia coei (.JM105 strain). G57 fusion proteins were expressed with IPTG induction as 63. 54, 45, 45, 35, 36. and 35 kDa proteins measured by SDS-PAGE. Each fusion protein was confirmed with G57 detection kit. Western blot analysis with the serum of a toxoplasmosis patient revealed antigenicity in proteins expressed by T37. S28, and Al9 but not those by Pl8. X9, Y10, and Z9. Antigenicity of p30 seems to be located either in N-terminal 115 part in the presence of middle 1/3 part or in the oligopeptides between margins of the first and second 1/3 parts.
The objectives of this study were to evaluate the effect of methylphenidate on attention deficit hyperactivity disorder (ADHD) and the comorbidity of the disorder, using child attention problem checklist to 56 (male: 38, female: 18) patients from, March 992 to February 1993. The results were as follows: Among 56 subjects, ADHD alone were 20 (335.71%) subjects, and with one additional diagnosis were 31 (55.35%) subjects and with two additional diagnosis were 5 (8.93%) subjects. There was significant improvement on symptoms in the scores rated by teachers in 7th and 28th day after menthlphenidate administration compared to baseline score (P<0.05) and 28th day score showed significant improvement compared to 7th day score (P<0.05) and 28th day score showed significant improvement compared to 7th day score (P<0.05). There was significant improvement on symptoms in the scores rated by parents in 28th day after methylphenidate administration improvement compared with 7th day score. In single administration of methylphenidate in Sunday morning score compared to afternoon score (P<0.05). In the administration of significant improvement on symptoms compared with the Sunday morning rating score of parents (P<0.05) and the 28th day comparison was also showed significant improvement on symptoms in the scores rated by teachers compared with the scores rated by parents on symptoms (P<0.05). Among group comparison, all groups showed significant improvements (P<0.05) except conduct disorder & oppositional defiant group.
The present study was carried out to investigate the effect of nitrogen(urea) application on the seasonal change in pH content of Bray No.1-P, organic matter, and exchangeable cations along the grassland soil profile and further to provide the fundamental information for optimizing the rate of fertilizer application to grassland. Soil samples were taken 20cm intervals upto 100cm soil depth in spring(May 26), summer(July 27), and autumn (October 18) of 1990. The obtained results are summerized as follow 1. In spring and summer, soil pH at 0-20cm soil depth of 28kg N/10a treatment was lowered by 0.7 and 1.0 in comparison with those the same soil depth of 0 kg N/10a treatment and the tendency in pH decrease during all season at the soil depth below 20cm was in the order of summer>spring>autumn. 2. Although Bray No.1-P content at the soil depth 0-20cm of 28kg N/10a treatment was lowered by 20ppm compared to 0 kg N/10a treatment in summer, there was no great difference in its content between 0kg N/10a and 28kg N/10a treatment at all soil depth in spring and summer. In autumn, its content at soil depth below 20cm of 28kg N/10a treatment was higher than that of in summer. 3. Organic matter content at 0-20cm soil depth of 0 and 28kg N/10a treatment in autumn was slightly lowered and on the whole there was very little change in it by soil depth and nitrogen application. 4. The calcium content of 0 and 28kg N/10a treatment was also slightly lowered by increase in soil depth and Mg and K contents were below 0.4 and 0.2 me/100g during all seasons, respectively. 5. Positive correlations were shown among the $NH_4-N$ content and pH, organic matter, Ca and Mg of 0 kg N/10a treatment, however, there was negative correlation ($r=-0.534^{*}$) between $NO_3-N$ content and pH of 28kg N/10a treatment in summer.
Interleukin 27 (IL-27) was discovered as a heterodimeric cytokine of the IL-12 family, and is composed of two subunits - Epstein-Barr virus induced gene 3 (EBI3) and p28. It acts as a versatile cytokine in the early regulation of Th1 initiation and in the negative regulation of the Th2 factor GATA binding protein 3 (GATA-3). This cytokine is mediated by the IL-27 receptor (WSX-1), which is highly expressed on $CD4^+$ T lymphocytes and NK cells. We previously identified four polymorphisms in the human IL-27p28 gene and suggested that the polymorphism of IL-27p28 is associated with susceptibility to asthma. To determine whether these IL-27p28 SNPs are associated with susceptibility to allergic rhinitis, the genotype and allele frequencies of IL-27p28 SNPs were analyzed between allergic rhinitis patients and healthy controls. Although the genotype and allele frequencies of IL-27p28 SNPs in allergic rhinitis patients were not significantly different from those of the control group, there was a suggestive difference (P=0.037) between these groups in total serum IgE levels in the g.2905T>G SNP of the IL-27p28 gene. Our result implies that the g.2905T>G SNP of the IL-27p28 gene might have an affect on IgE production in allergic rhinitis patients.
In this paper, we investigate the superstability for the p-power-radical sine functional equation $$f\(\sqrt[p]{\frac{x^p+y^p}{2}}\)^2-f\(\sqrt[p]{\frac{x^p-y^p}{2}}\)^2=f(x)f(y)$$ from an approximation of the p-power-radical functional equation: $$f(\sqrt[p]{x^p+y^p})-f(\sqrt[p]{x^p-y^p})={\lambda}g(x)h(y),$$ where p is an odd positive integer and f, g, h are complex valued functions. Furthermore, the obtained results are extended to Banach algebras.
Among the annotated ORFs of Streptomyces coelicolor, SCO7697 was supposed to encode for phytase (myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolase). The DNA fragment containing SCO7697 was cloned by the PCR from the chromosomal DNA of S.coelicolor A3(2)M. The cloned fragment was introduced into E. coli expres-sion vector, pET28a(+), to yield two recombinant plasmids, pET28-SP and pET28-LP, which were designed to encode different length of proteins. When the pET28-SP and pET28-LP were introduced into E. coli BL21, the transformants successfully overexpressed recombinant proteins, but the molecular weights of the expressed pro-teins were appeared bigger than those of expected in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The shift of cul-tural temperature from 37 to $30^{\circ}C$ made most of expressed protein be solubilized. The expressed protein, however, did not show any phytase activity. When the DNA fragment with its own promoter placed on the E. coli-Streptomyces vector, pWHM3, and introduced into S. lividans, the phytase activity was not detected either. These results suggest that even though the SCO7697 was annotated as a probable phytase with high probability (E value is $6e^{-89}$), the real product doest not have phytase activity.
This study was carried out to evaluate the quality characteristics of aerobic packed pork during storage after fermentation with soy sauce, red pepper and soybean paste seasonings. The ham of pork were cut to cube($7{\time}10{\time}2$cm) and Korea traditional seasonings such as soy sauce(T1), red pepper paste(T2), soybean paste(T3) were seasoned by the proportions of meat to seasonings(1:1), respectively. The seasoned sample were fermented by fill into plastic box at $1{\pm}1^{\circ}C$ for 10 days. And then, the fermented meat from each pack was aerobic packed and stored at $1{\pm}1^{\circ}C$ for up to 28 days. The pH of T1 were significantly(P<0.05) lower compared to T2 and T3 at 1 day of storage, but were significantly(P<0.05) higher at 14 and 28 days of storage. The water-holding capacity of T1were significantly(P<0.05) higher compared to T2 and T3 at 1 and 28 days of storage. The shear force of T3 were significantly(P<0.05) lower compared to T1 during storage. The surface meat L* values of T3 were significantly(P<0.05) higher than those of T1 and T2, but a* and b* values of T2 were significantly(P<0.05) higher. The volatile basic nitrogen(VBN) of T3 were significantly(P<0.05) lower compared to T2 at 1 and 14 days of storage, but T1 were significantly(P<0.05) lower at 28 days of storage. The thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) of T3 were significantly(P<0.05) lower compared to T1 and T2. The total plate counts of T1 were significantly(P<0.05) lower compared to T2 and T3 at 1 day of storage, but T2 were significantly(P<0.05) lower at 14 and 28 days of storage. The Escherichia coli of T1 and T3 were significantly(P<0.05) lower compared to T2 at 1 day of storage. The Lactobacilli spp. of T2 were significantly(P<0.05) lower compared to T1 and T3.
The putative endochitinase gene, yheB of Escherichia coli K-12 is not expressed under lab culture conditions. The endochitinase gene was amplified by PCR and subcloned into pET28c vector and pQE9 vector, respectively. The endochitinase produced in E. coli harboring pET28c containing yheB or pQE9 vector containing yheE was partly released into the growth medium. The overproduced endochitinase was partially purified by His affinity column chromatography and DE-52 column chromatography. The apparent molecular weight of the endochitinase determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was about 97,000. The purified E. coli endochitinase showed maximal chitinolytic activity at pH 6 and $40^{\circ}C$.
Objective: Recent studies have demonstrated that lin-28 homolog B (LIN28B)/miRNA let-7 (let-7) plays a role in the regulation of pubertal onset in mammals. However, the role of LIN28B/let-7 in the onset of ovine puberty remains unknown. We cloned the Duolang sheep Lin28B cDNA sequence, detected the expression change of LIN28B, let-7a and let-7g in hypothalamus, pituitary and ovary tissues at three different pubertal stages. Methods: The reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to clone the cDNA sequence of LIN28B gene from Duolang sheep and the bioinformatics methods were applied to analyze the amino acid sequence of LIN28B protein. The mRNA expression levels of the LIN28B gene at different pubertal stages were examined by real time RT-PCR. Results: LIN28B cDNA of Duolang sheep was cloned, and two transcripts were obtained. The amino acid sequence of transcript 1 shares 99.60%, 98.78%, and 94.80% identity with those of goat, wild yak and pig, respectively. Strong LIN28B mRNA expression was detected in the hypothalamus, pituitary, ovary, oviduct and uterus, while moderate expression was found in the liver, kidney, spleen and heart, weak expression was observed in the heart. No expression was found in the lungs. Quantitative real-time PCR (QPCR) and western-blot analysis revealed that the LIN28B was highly expressed in the hypothalamus and ovary at prepuberty stages, and this expression significantly decreased from the prepuberty to puberty stages (p<0.05). Markedly increased levels of mRNA expression were detected in the pituitary from prepuberty to puberty (p<0.05) and then significantly decreased from puberty to post-puberty (p<0.05). The expression levels of let-7a and let-7g showed no significant changes among different pubertal stages (p>0.05). Conclusion: These results provided a foundation for determining the functions of LIN28B/let-7 and their role in the onset of sheep puberty.
Aggregation of normally soluble proteins can cause disease-related problems. Tryptophan synthase α-subunit (αTS) in E. coli adopts one of most popular structural scaffolds, the TIM barrel fold. Previous mutagenesis of the αTS gene resulted in many aggregation-prone mutant proteins. Here, Y173F (Tyr at residue 173 to Phe) substitution, which imparts increased stability, was tested for its ability to suppress aggregation of aggregation-prone mutant proteins (Y4C, S33L, P28L, P28S, G44S, D46N, P96L, and P96S). Aggregation was suppressed in all eight severe aggregate-forming mutants (all differing in their mutation positions), by the Y173F replacement. P28L αTS, which was available in pure form, was further analyzed and showed reduced secondary structure content, lower stability, and a looser structure with more exposed hydrophobic surface compared to the wild type protein. A double mutant P28L/Y173F protein showed almost no indication of these changes compared to the wild type protein. We hypothesized that Tyr at position 173 in αTS is positioned at the hydrophobic core and may serve to suppress the aggregation of this protein caused by other residues. Important residue (s) could be working widely in the prevention/suppression of protein aggregation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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