The objectives of this research were to 1) isolate and identify thermophilic bacteria for food waste treatment; 2) investigate the capability of food waste treatment using Bacillus species; and 3) develop air-dried Bacillus starters for food waste treatment. Five Bacillus species were isolated from food wastes and identified as Bacillus licheniformis (B. licheniformis) G1, Bacillus circulans C2, Bacillus subtilis (B. subtilis) E1, Bacillus vanillea F1, and Bacillus atrophaeus G2 based on 16S rDNA sequencing. Each identified Bacillus and the mixture of Bacillus species were cultivated in the standard food waste at $45^{\circ}C$ for 8 d. Changes in cell count, solid contents, and pH of the food waste were monitored during cultivation. Air-dried Bacillus cell powders were prepared using wheat flour and lactomil as excipients, and the cell count and survival rate were determined. The cell count of B. licheniformis G1 exhibited the highest number among the tested Bacillus (${\sim}10^8CFU/mL$). The greatest reduction in solid contents of food waste was achieved by B. subtilis E1 (22.6%). The mixture of B. licheniformis G1 and B. subtilis E1 exhibited a synergistic effect on the reduction of solid contents. Lactomil was determined as better excipient than wheat flour based on the greatest survival rate of 95%.
박테리오신 BSCX1은 Bacillus subtilis cx1에 의해 생산되는 항균성 peptide이다. B. subtilis cx1의 박테리오신(BSCX1)은 Bacilius subtilis ATCC6633, Listeria monocytogenes KCTC3569를 포함한 그람양성균과 Salmonella typhi ATCC19430, Escherichia coli ATCC25922와 같은 그람음성균에 대해서도 비교적 넓은 항균활성 범위를 가진다. 박테리오신 생산균주인 B. subtilis cx1과 그것의 감수성 균주인 B. subtilis ATCC6633을 공동 배양한 결과, 박테리오신 BSCX1의 생산이 증가됨을 확인할 수 있다. 이 결과는 박테리오신 생산균주 B. subtilis cx1의 성장 배지내에 박테리오신 감수성 균주가 존재함이 BSCX1 생산을 촉진시키는 것을 의미한다. 감수성 균주의 박테리오신 유도 작용을 확인하였으므로 유도물질이 감수성 균주의 어느 위치에 존재하는지 밝히기 위해 B. subtilis ATCC6633을 분획하여 실험한 결과 세포내 분획과 세포파쇄물에 모두 유도물질이 존재함을 확인하였다. BSCX1 유도물질의 유도활성은 pH 2.5에서 pH 9.5에 걸쳐 전 구간에서 유지되었으며, $50^{\circ}C$이상에서는 3시간 이내에 불활성화 되었다. 유도물질에 단백분해효소인 proteinase K를 처리한 결과 유도활성이 사라져 단백질성 물질임을 알 수 있었다.
식물근부병의 방제균으로 선발된 Bacillus subtilis YBL-7의 식물부균 Fusarium solani에 대한 길항력을 유전공학적 조작에 의해 다목적으로 증강시킬 수 있는지를 타진하기 위해 외부유전자인 Bacillus pasteurii의 urease 유전자를 생물방제균 B.subtilis YBL-7내 도입자하고자 시도하였다. 외부 urease 유전자는 B.pasteurii의 urease gene을 shuttle vector인 pGR71의 HindII site에 삽입하여 E.coli내에서 발현시킨 pGU66을 사용하여 형질전환시켰으며 이때의 최적 형질전환조건과 도입된 urease 유전자의 발현을 조사해 보았다.
The neutral fraction of whole volatile flavor compounds produced by Bacillus licheniformis SSA3 and Bacillus subtilis PM3 in cooked soybean was identified by using GC/MS and Kovats retention index. The presence of dimethyl trisulfide, which emits characteristically Korean soy sauce-like odor in traditional Korean soy sauce, in identified volatile flavor components was confirmed. Dimethyl trisulfide may be produced by Bacillus licheniformis SSA3 and Bacillus subtilis PM3 in cooked soybean.
섬유소를 비롯한 단백질, 지질, 녹말을 분해할 수 있는 세균을 된장으로부터 분리하여 동정한 결과 Bacillus subtilis로 분류되었으며, Bacillus subtilis CK-2로 명명하였다. 분리균주는 $40\sim45^{\circ}C$의 비교적 넓은 온도 범위와 pH 6~9의 넓은 pH 범위, 그리고 NaCl 0~3% 범위에서 잘 자랐으며, 높은 자가분해효소 활성을 갖는 것을 알 수 있었다. B. subtilis CK-2가 분비하는 가수분해효소들은 대부분 세균의 생장과 거의 비례적으로 세포외 활성을 나타내는 1차 대사산물로 확인되었다. 이상의 결과로부터 B. subtilis CK-2는 농수임산물 폐기물이나 음식물 폐기물의 퇴비화, 사료 생산 등에 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각한다.
청국장은 전통발효식품으로 우리 식단의 중요한 단백질 공급원으로 자리해 왔으며, 발효과정 중에 나타나는 생리활성기능은 미생물의 작용으로 생성되는 점질물에 의한 것으로 추정된다. 청국장 점질물의 생리활성기능을 확인하기 위하여, 점질물을 첨가하여 유해미생물의 성장곡선을 관찰하였다. 발효균주 Bacillus circulans K-1, Bacillus spp. N-l, Bacillus subtilis CH-1균주를 이용하여 각각의 청국장을 제조한 후, 청국장으로부터 생성된 점질물인 K-1, N-1, CH-1 등을 분리하여 실험에 사용하였다. 청국장 점질물 K-1, N-1, CH-1을 이용하여 항균활성을 측정한 결과, 그람양성세균(Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Microscopics luteus), 그람음성세균(Escherichia coli O157:H7, Salmonella typhimurium, Pseudomonas fluorescens), 효모(Pichia membyanaefacien, Sacchamyces cerevisiae, Candida albicans)등에 항균작용을 나타내었다. 청국장 점질물은 Bacillus cereus에 대해 80%의 높은 성장억제력을 나타내었으며, Escheyichia coli O157:H7에 대해서는 20%의 약한 성장억제력을 나타내었다. 청국장 점질물 중 CH-1은 세균, 효모에 대해 40%, K-1과 N-1은 20%정도의 성장억제력을 나타내었다.
한국 발효식품의 보존성을 높이기 위한 스타터 균주를 얻기 위하여 고추장에서 Bacillus subtilis BS16045를 분리하였다. B. subtilis BS16045에 대한 유전체 분석을 실시하였으며, G+C 비율이 43.6%인 4,165,121 bp 크기의 염기서열을 얻었다. 또한 이 유전체로부터 항진균 및 항균 활성에 연관이 있는 surfactin, kanosamine, bacillaene, plipastatin, subtilosin A, bacilysin 생산 유전자들을 확인하였다. 이러한 결과들을 통해 B. subtilis BS16045는 장류 제조시설에서 유해균의 오염문제를 해결할 수 있는 스타터로 이용될 수 있을 것으로 보인다.
Bacillus subtilis strain with highly active chitosanase was isolated from the intestine of Sebastiscus marmoratus (scorpion fish). It was named as Bacillus subtilis CH1 by morphological, biochemical and 165 rRNA gene analysis. The optimal conditions for chitosanase production were investigated. The optimum carbon and nitrogen sources for Bacillus stibtilis CH1 were 2% starch and 1% yeast extract respectively. Unlike other chitosanases, the expression of this chitosanase was not induced or slightly induced with chitosan. The chitosanase secreted into the medium were concentrated with ammonium sulfate precipitation and purified by gel permeation chromatography. The molecular weight of purified chitosanase was 30 kDa. The optimum pH and temperature of purified chitosanase were 5.5 and $60^{\circ}C$ respectively. The purified chitosanase was continuously thermostable at $40^{\circ}C$ and showed stable activity between pH 6.0 and 8.0. Chitosanase activity of Bacillus subtilis CH1 under optimum condition was 4.1 units/ml.
The extracellular bacteriolytic enzyme from alkalophilic Bacillus sp. YJ-451 was endopeptidase which hydrolyzes the peptide bond at the amino group of D-glutamic acid in the peptidoglycan. Protoplast transfomation system of B. subtilis by the lytic enzyme that differs, in mechanisms, from lysozyme which was used to transformation of B. subtilis was investigated. High protoplast yield was obtained from cells cultured in PAB at the late logarithmic growth phase.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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