• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제58권4호
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• pp.349-354
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• 2015

Brown blotch disease in cultivated mushrooms is caused by Pseudomonas tolaasii, which secretes a lipodepsipeptide, tolaasin. Tolaasin is a pore-forming toxin in the cell membranes, thus destroying the fruiting body structure of mushroom. In this study, we isolated pathogenic bacteria from mushrooms that had symptoms of brown blotch disease. In order to identify these bacteria, their 16S rRNA genes were sequenced and analyzed. Pathogenic bacteria identified as Pseudomonas species were thirty five and classified into five subgroups: P1 to P5. Each subgroup showed different metabolic profile measured by API 20NE kit. Fifty percent of the bacteria were identified as P. tolaasii (P1 subgroup). All five subgroups caused the formation of brown blotches on mushroom tissues and the optimum temperature was 25oC, indicating that they may be able to secrete causal factors, such as tolaasin and similar peptide toxins. These results show that there are at least five different pathogenic Pseudomonas species as blotch-causing bacteria and, therefore, strains from the P2 to P5 subgroups should be also considered and studied as pathogens in order to improve the quality and yield of mushroom production.

• KSBB Journal
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• 제14권2호
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• pp.146-152
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• 1999

갈반병이 유발된 느티리버섯과 비섯 재배장 주변 토양에서 채집한 균주로부터 갈반병 원인균주 4개와 갈항균주 3개를 선발하였다- 선발된 균주를 API 2DE kit에 의해 동정한 결과 갈반병 원인 균주 P-24, P-28은 Pseudomonas putida로 P-27, P-33은 P.tolaasii로 동정되었으며, 길형균주 중 A-ll, A-20은 Pseudomonas fluorescence로 A-29는 Pseudοmonas sp.로 동정되었으며, 그 중 A-ll 균주가 버섯 균사 및 자실체에 해를 주지 않으면서 길항성이 우수한 균주로 선발되었다. 길항성은 갈반병 원인균 대 길항균의 농도비를 1:1로 처리하였을 때 길항성이 양호하였다.

• 한국균학회지
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• 제38권1호
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• pp.69-74
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• 2010

세균갈색무늬병 병원균의 접종에 의해 심한 병징을 보이는 느타리 균주와 매우 약한 병징을 보이는 균주를 모균주로 선발하고, 각각의 모균주로부터 얻은 단핵균주의 교배를 통해 F1 교잡균주를 얻었다. 세균갈색무늬병 발병도가 다른 11개의 F1균주와 모균주의 자실체 표면의 소수성과 발병도를 조사하였다. 발병도와 소수성 사이의 상관계수는 2번의 독립된 실험에서 각각 0.68과 070이었다. 자실체의 발병도와 버섯재배사에서 조사한 발병율 사이의 상관계수는 각각 046과 0.52이었다. GFP을 발현시킨 Pseudomonas tolaasii을 자실체표면에 접종 후 공초점현미경으로 관찰한 결과 발병도가 낮은 균주의 자실체 표면에서보다 높은 균주의 자실체 표면에서 보다 많은 세균의 집단화가 관찰되었는데, 이 결과는 발병도가 높은 균주의 갓 표면에서 더많은 세균이 증식하였음을 의미한다. 이상의 결과는 느타리 자실체 표면의 소수성이 세균갈색무늬병 발병도에 영향을 미치는 것을 암시한다. 즉 세균현탁액 방울이 갓 표면에 오래 유지되면 더 심한 병징이 형성된다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제38권5호
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• pp.472-481
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• 2022

Brown blotch disease, caused by Pseudomonas tolaasii, is one of the most serious diseases in mushroom cultivation, and its control remains an important issue. This study isolated and evaluated pathogen-specific bacteriophages for the biological control of the disease. In previous studies, 23 varieties of P. tolaasii were isolated from infected mushrooms with disease symptoms and classified into three subtypes, Ptα, Ptβ, and Ptγ, based on their 16S rRNA gene sequences analysis and pathogenic characters. In this study, 42 virulent bacteriophages were isolated against these pathogens and tested for their host range. Some phages could lyse more than two pathogens only within the corresponding subtype, and no phage exhibited a wide host range across different pathogen subtypes. To eliminate all pathogens of the Ptα, Ptβ, and Ptγ subtype, corresponding phages of one, six, and one strains were required, respectively. These phages were able to suppress the disease completely, as confirmed by the field-scale on-farm cultivation experiments. These results suggested that a cocktail of these eight phages is sufficient to control the disease induced by all 23 P. tolaasii pathogens. Additionally, the antibacterial effect of this phage cocktail persisted in the second cycle of mushroom growth on the cultivation bed.

• 한국식물병리학회지
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• 제14권2호
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• pp.177-183
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• 1998

A DNA fragment which is involved in tolassin production was cloned to obtain a molecular marker of Pseudomonas tolaasii, a casual agent of bacterial brown blotch disease of oyster mushroom (Pleurotus ostreatus). Tolaasin is a lipodepsipeptide toxin and known as a primary disease determinant of the P. tolaasii. It is responsible for formation of white line in agar when P. tolaasii were cultured against white line reacting organisms (WLROs). White line negative mutants (WL-) were generated by conjugation between rifampicin resistant strain of P. tolaasii and E. coli carrying suicidal plasmid pSUP2021 : : Tn5. The ability of tolaasin production of the WL- mutants was examined by hemolysis test, pathogenicity test, and high pressure liquid chromatography (HPLC) analysis of culture filtrate. All of the WL- mutants were lost the ability of tolaasin production (Tol-). Genomic library of the Tol- mutant was constructed in pLAFR3 and the cosmid clone containing Tn5 was selected. DNA fragment fro franking region of Tn5 was cloned from the plasmid and used as a probe in Southern blot. DNA-DNA hybridization with the probe to total DNA from group of bacteria ecologically similar to P. tolaasii including WLORs, fluorescent Pseudomonads isolated from oyster mushroom, P. agarici, P. gingeri, and some of other species of Psedomonas showed that some of the tested bacteria do not have any hybridized band and others have bands sowing RFLP. The cloned DNA fragment or its nucleotide sequence will be useful in detection and identification of the P. tolaasii.

• Applied Biological Chemistry
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• 제43권3호
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• pp.190-195
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• 2000

재배버섯에 갈색의 침몰성 반점들로 나타나는 갈반병(brown blotch disease)은 Pseudomonas tolaasii의 펩티드성 독소인 tolaasin에 의해서 유발된다. Tolaasin은 18개의 아미노산으로 구성된 분자량 1,985 Da의 lipodepsipeptide이며, 생체막에 pore를 형성하여 버섯세포 뿐만 아녀라 세균, 곰팡이, 식물 및 동물세포를 파괴한다. Tolaasin의 활성은 용혈성 독소의 활성측정에 널리 쓰이는 적혈구를 이용하여 독소의 용혈활성을 측정함으로써 이루어졌다. Tolaasin의 용혈활성은 적혈구의 파괴시 방출되는 헤모글로빈 양을 420 nm에서의 흡광도 증가로 측정하거나, 잔존하는 적혈구에 의한 600 nm에서의 흡광도로 측정하였다. P. Tolaasii 배양액의 용혈활성은 배양중 정체기 초기에 증가하기 시작하여 정체기 후기에서 최대로 나타났다. Tolaasin의 용혈활성은 개와 쥐의 적혈구에서 높게 나타났으며, 상대적으로 토끼와 닭의 적혈구에서는 낮았다. Tolaasin의 용혈활성에 미치는 양이온들의 효과에서 $ZN^{2+}$ 뿐만 아니라, $Cd^{2+}$과 $L^{3+}$이 tolaasin의 용혈활성을 저해하였으며, 음이온의 경우 $CO_3^2$가 용혈활성을 지연시켰고, 반면 $PO_4^{2-}$의 경우 용혈활성을 증가시켰다.

• 한국식물병리학회:학술대회논문집
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• 한국식물병리학회 1999년도 정기총회 및 춘계 학술발표회
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• pp.46.1-46
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• 1999

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제61권4호
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• pp.405-410
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• 2018

Pseudomonas tolaasii 6264 균주는 버섯 조직에서 분리하였고, 갈반병을 일으키는 주요 병원균 중 하나로 확인되었다. 이 균주는 펩티드 독소인 tolaasin과 유사 펩티드를 분비한다. P. tolaasii 6264는 지난 20여년간 갈반병 연구를 위한 대표균주로 사용되었으며, 이 균주는 갈반형성능, 용혈활성, 흰색침강선형성능을 확인한 후 사용하였다. 본 연구에서는, 저장 기간에 따라 P. tolaasii 6264 균주의 특성을 비교분석하였다. 2012년 이후 저장된 P. tolaasii 6264 균주를 매년 배양하여 이들 균주의 병원성을 분석하였다. 16S rRNA 염기서열을 비교하였을 때, 모든 균주들은 두 그룹으로 나뉘어졌다. 용혈활성, 갈반형성능, 흰색침강선형성능을 포함한 균주의 병원 특성도 조사하였다. P. tolaasii 6264-15-2와 P. tolaasii 6264-17 균주는 세 가지 활성을 모두 가졌으나, 그 외 균주들은 갈반형성능만 보였으며 다른 병원 특성들은 잃었다. 각 균주 배양액으로부터 tolaasin 펩티드를 순수분리하였으며, 질량분석기를 이용하여 분석하였다. P. tolaasii 6264-15-2와 P. tolaasii 6264-17 균주는 Tol I (1987 Da), Tol II (1943 Da)을 비롯한 유사체(1973 Da, 2005 Da)를 분비하였으며, 다른 균주의 배양액에서는 이 펩티드들의 일부가 발견되지 않았다. 이러한 결과는 P. tolaasii의 병원성이 저장기간동안 변할 수 있음을 보여준다.

• 한국균학회지
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• 제19권3호
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• pp.226-230
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• 1991

우리나라에서 1986년 땅콩그물무의병(갈문병(褐紋病))의 병원균을 처음 동정한 이래 본 병은 전국적으로 확산되어 분포되고 있으며 땅콩에 큰 피해를 주고있다. 그 병은 땅콩의 줄기를 따라 잎에 나타나는데 잉크방울 병반에 그물모양을 띄면서 나중에는 암갈색병반으로 진전된다. PDA 상에 암갈색 균총을 이루고 무색의 분생포자는 격막이 없거나 혹은 한개 있으며 크기는 $3.0{\times}14.5\;{\mu}m$이고 최적온도는 $24-26^{\circ}C$이다. 포장에서의 품종저항성은 버지니아형 땅콩이 스페인형 땅콩보다 저항성을 보였다.

• 한국균학회지
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• 제45권4호
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• pp.370-376
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• 2017

양송이 재배에서 큰 피해를 주고 있는 세균성갈색무늬병(bacterial brown blotch disease)을 유발하는 3가지 병원균에 대해 양송이가 가지는 내성이 후세대에 전달되는지 검증한 결과는 다음과 같았다. 세균성갈색무늬병에 대한 양송이의 내성 정도는 균사생장능력과 상관관계가 없었다. 세균성갈색무늬병에 내성이 강하였던 계통의 후세대 단포자들은 균사체 단계에서는 부모세대처럼 강한 내성을 보이지 않으며, 자실체에서는 균사체에 비해 내성은 감소하였다. 세균성갈색무늬병에 내성이 약하였던 계통의 후세대 단포자들은 균사체 단계에서는 부모세대와 마찬가지로 내성이 매우 약하여, 부모세대가 가진 내성이 후세대로 전달되는 것으로 추측되었다. 자실체에서의 내성은 균사체에서 내성 유무와는 상관관계가 없었다. 따라서 자실체의 갈변 현상은 다른 요인이 복합적으로 관여하여 유발될 것으로 판단된다. Pseudomonas tolaasii는 자실체에서 Pseudomonas agarici에 비해서 갈변을 더 높게 유발시켰으며, Pseudomonas reactans는 균사체에는 큰 영향을 주지 못했지만, 자실체의 갈변에는 영향을 주었다. P. agarici는 자실체보다 균사체 생장억제능이 높았다.