• 제목/요약/키워드: Proteinase

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Bacillus licheniformis SSA3-2M1 이 생산하는 Proteinases

  • 장영채;이경형;김성영;조윤래;김종규
    • 미생물학회지
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    • 제30권4호
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    • pp.239-245
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    • 1992
  • 한국 재래식 간장의 독특한 맛을 생성하는 B. licheniformis SSA3-2M1 의 배양액으로부터 proteinase 를 정제한 결과 2 종의 proteinase 의 역가를 확인할 수 있었다. Proteinase I 의 역가는 II 보다 두배가량 되며 최적 pH 가 7-11.5 이었다. Proteinase I 의 역가는 II 보다 두배가량 되며 최적 pH 가 7-11.5 이었다. Proteinase II 의 최적 pH 는7-9 이며 proteinase II 는 I 보다 pH3-5 부근의 상성에서 더 안정하고 활성이 강하였다. Proteinase I 과 II 의 최적온도는 각각 50.deg.C 였으며, proteinase II 의 온도안정성은 30-45 .deg.C 온도범위에서 proteinase I 보다 더 안정하였다. Proteinase I 은 45.deg.C 에서 60% 가 실현되었으며 protein II 는 45.deg.C 에서 5% 가량 실활되었다. 염에 대한 영향은 proteinase I 이 염의 농도 25-35% 범위에서 proteinase I 보다 효소활성이 높은 것으로 나타났다. Proteinase 치는 casein 을 기질로 사용하였을 경우, proteinase I 은 6.89 mg/ml, proteinase II 는 9 mg/ml 의 $K_{m}$ 치를 나타내었다. 이결과는 proteinase I 이 II 보다 기질에 대한 친화력이 높은 것으로 나타났다. 각종 금속이온의 농도 1 mM 에서는 Pb($CH_{3}$CCO)$_{2}$ 는 효소 활성을 증가시켰고 $ZnSO_{4}$, $7H_{2}$O, $K_{2}$$SO_{4}$, $HgSO_{4}$ 등은 저하시켰으며, 5 mM 이상에서는 $HgSO_{4}$$ZnSO_{4}$ 가 다른 염에 비해서 특히 효소활성을 많이 저히하였다. Proteinase I 과 II 는 대두 단백을 가수분해하여 peptide 와 아미노산을 생성하였으머 peptide 를 다시 아미노산으로 분해하였다. Proteinase I 과 II 는 한국재래식 간장의 중요 맛성분인 아미노산을 생성하는 주효소로 밝혀졌다.

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Penicillium oxalicum HCLF-34로부터 Acid Proteinase의 부분유전자 Cloning 및 Sequencing (Cloning and Sequencing of Gene Fragment of Acid Proteinase from Penicillium oxalicum HCLF-34)

  • 현성희;천재순;강상순;김진규
    • 미생물학회지
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    • 제40권1호
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    • pp.12-16
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    • 2004
  • Acid proteinase는Aspergillus niger (acid pretense A)와 Cryphonectria parasitica (acid proteinase EapC)에서 분비하는 단백질로서 치즈를 제조할 때 이용하는 단백질이다. 본 연구에서는 Penicillium oxalicum HCLF-34로부터 acid proteinase의 부분유전자를 기존에 밝혀진 acid proteinase의 homology 정보로부터 degenerate primer를 제작하여 PCR방법을 이용하여 cloning하였다. Cloning된 유전자로부터 438 bp 염기서열을 분석하였으며, 이 염기서 열을 146개의 아미노산 정보로 변환하여 acid proteinase family와 homology를 비교한 결과 acid protease A와 71% 아미노산 서열의 homology를 나타내었고, EapC와 67%의 아미노산 서열 homology가 확인되었다.

치수 및 치근단 질환에서의 단백분해효소 및 단백분해효소 억제제의 활성도에 관한 연구 (A STUDY ON THE ACTIVITY OF PROTEINASE AND PROTEINASE INHIBITOR IN PULPAL AND PERIAPICAL PATHOSES)

  • 김진우;;임성삼
    • Restorative Dentistry and Endodontics
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    • 제25권4호
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    • pp.509-526
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    • 2000
  • It is known that injuries to the dentin have a corresponding inflammatory effect on the pulp and these inflammatory effects frequently result in pulpal pathoses due to progressive degradation of pulpal connective tissue. It was supposed that the tissue degradation in different inflammatory process was controlled by proteinase activity and antiproteinase activity. Therefore, the purpose of this study was to examine the pulp and periapical pathoses in terms of the activities of proteinase and proteinase inhibitor, 37 pulpal tissues were divided by clinical diagnostic criteria into normal pulp, acute inflamed pulp, and chronic inflamed pulp, and then those groups were subdivided by histopathological findings into 5 pulpal pathoses groups, i.e. normal pulp (P1, n=8), chronic pulpitis with fibrotic change (P2, n=2), chronic pulpitis with dystrophic calcification (P3, n=11), chronic pulpitis with pulp abscess (P4, n=7), acute pulpitis with necrotic change (P5, n=4), 26 periapical tissues were also divided by ordinary histopathological findings into 3 periapical pathoses group, i.e., granuloma (A1, n=17), cyst (A2, n=2) and abscess (A3, n=7). The activities of proteinases (cathepsin G, MMP-3) and proteinase inhibitors (${\alpha}1$-AT, TIMP-1 and, SLPI) were evaluated by RT-PCR and immunohistochemical methods. The results were as follows. 1. Generally, the intensity of immunohistochemical staining of proteinases and proteinase inhibitors increased in P2 and P5 groups compared to P1 group. 2. The immunohistochemical stain of proteinases and proteinase inhibitors was intensely detected in P2 group, showing low inflammatory reaction and low tissue degradation, but it was reduced in P3 and P4 groups, showing severe tissue degradation. 3. The distribution of proteinases and proteinase inhibitors in pulpal pathoses was consistently presented by immunohistochemical staining, while the expression of proteinase and/or proteinase inhibitors mRNAs in pulpal pathoses was occasionally detected by RT-PCR methods. 4. RT-PCR of proteinase and proteinase inhibitors was usually positive in P2, showing rare tissue degradation, but it was almost negative in P3 and P4, showing severe tissue degradation. 5. We presume that the reason why the level of proteinase and proteinase inhibitors was so sparse in RT-PCR method is due to the abrupt decrease of mRNA synthesis or degradation of synthesized mRNA of proteinase and/or proteinase inhibitors depend on the inflammatory reaction and/or on the degradation of pulp tissues(P3, P4). 6. Pulpal pathoses groups showed significant lower RT-PCR detection of proteinases and proteinase inhibitors than the periapical pathoses group(p<0.05), and there is no significant difference among the periapical pathoses groups(p>0.05).

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탁주료중의 단백질분해효소에 관한 연구 (Studies on the proteinase in Takjoo mashes during the process of brewing)

  • 홍순우;하영칠;민경희
    • 미생물학회지
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    • 제7권3호
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    • pp.115-124
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    • 1969
  • The mash of Takjoo, Korean flour wine, is fermented through two brewing processes ; the primary brewing process to saccharify and the main one to produce ethyl alcohol. The activities of acid proteinase (pH3), weak acid proteinase (pH 6), and alkaline proteinase (Ph 80 on the processes are determined with time by the Folin phenol method as a strength of casein digestion. Hydrogen ion concentration, the content of total organic acids, protein, free amino acids and oligopeptides, which effect the activities of proteinase, are also measured. The results are briefly summarized as follows : 1. In general, the activities of acid proteinase and weak acid proteinase in the mesh of primary brewing process are stronger than those in main brewing process. 2. The activities of acid proteinase are remarkably stronger than those of weak acid proteinase in both processes. It reveals that they decrease slowly through the fermentation. Activities of alkaline proteinase are weaker than others. 3. As the raw materials are mixtured, the total amount of organic acids is equivalent to 0.150 mg/ml acetic acid in the mesh of primary brewing process and 0.02 mg/ml acetic acid in the main one. They increase gradually with time. 4. Hydrogen ion concnetration shows 3.9 in the mesh of main brewing process and 3.28 in the primary one. They increase to the maximum in 60-72 hrs., and decrease since 108 hrs. 5. The content of crude protein shows 66.90mg/ml in the mesh of main brewing process, while shows 64.29mg/ml in the mesh of primary one. they decrease slowly with time. it seems that a small content of crude protein, as a substrate, converts into amino acids and soluble nitrogen compounds by proteinase. 6. The content of free amino acids and oligopeptides shows 0.36 mg/ml in the mesh of primary brewing process and 0.24mg/ml in the main brewing process. It is evident that the reason they increase continuously through the fermentation is the effect of proteinase. 7. According to the results, the strong activities of proteinase in primary brewing process has been derived from the decrease of hydrogen ion concentration due to the production of organic acids.

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폐흡충(Parnonimr westemani)성충에서 정제한 cysteine proteinase의 특성 (Characterization of a cysteine proteinase from adult worms of Paragonimus westermani)

  • 송철용;김동수
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제32권4호
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    • pp.231-242
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    • 1994
  • 자연 감염된 가재에서 폐흡충의 피낭유충을 분리하고 개에 경구 감염시켜 성충을 얻었다. 폐흡충 성충의 조효소를 ion-exchange chromatography, affinity chromatography와 gel filtration chromatoglaphy를 실시하여 cysteine proteinase를 순수 정제하였다. 이들 효소의 생화학적 특성과 분해능을 관찰하였으며. 효소면역전기영동이적법을 이용하여 순수 정제한 효소의 항원성을 관찰하였다. 정제된 효소는 저분자 합성기질인 CBZ-arg-arg-AFC 보다 CBZ-phe-arg-AFC에서 높은 활성을 보였으며. 이들 효소는 thiol-dependent이었다. 정제된 효소 및 조효소의 최적 pH는 5.5이었고. 최적 mole 농도는 0.1 M(0.1 M sodium citrate, pH 5.5)이었고, 이들 효소는 $4^{\circ}C$에서 48시간 동안 80%의 안정성을 보였다 정제된 효소의 native 분자량은 20.000 dalton이었고, SDS- PAGE상에 나타난 분자량은 17,500 dalton이었다 정제된 효소는 cysteine proteinase 특이 억제 인자인 E-64, lodoacetic acid, NEM에 의해 활성이 완전히 억제되었으며, serine proteinase, aspartic proteinase 및 metallo proteinase 특이 억제인자에 의해 활성이 억제되지 않았다. 정제된 효소는 collagen(Type I)과 hemoglobin을 분해하였고, 효소면역전기영동이적법으로 정제된 효소의 항원성을 확인하였다.

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Streptomyces fradiae에서 분리한 단백질 분해효소저해물질의 특성 (Characters of proteinase inhibitor isolated from streptomyces fradiae)

  • 정영화;이병규;이계준
    • 미생물학회지
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    • 제28권1호
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    • pp.65-70
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    • 1990
  • 방선균의 세포분화와 관련된 연구의 일환으로 Streptomyces fradiae NRRL2702가 생성하는 단백질분해효소 저해물질을 분리정제하여 그 특성을 분석하였다. 즉 S. fradiaesm s일반 환경 조건하에서 단백질분해효소를 생성하나 특정 조건하에서는 그 단백질의 활성을 저해하는 저해제를 생성함을 알았다. 이 저해제의 분자량은 16,800이며 serine proteinasem이 일부만을 저해하는 특징이 있었다. Pronase E의 활성의 저해양상은 competitive inhibition 이었고 열에 대하여 매우 안정함을 알았다.

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Pseudomonas aeruginosa 세포질외 serine계열 단백질 분해효소의 정제 및 특성 (Purification and Characterization of Extracellular Proteinase Produced by Pseudomonas aeruginosa)

  • 이은실;송철용
    • 미생물학회지
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    • 제29권6호
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    • pp.345-352
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    • 1991
  • A serine proteinase of molecular weight 60 kd was purified from culture supernatant of P. aeruginosa using DEAE-Trisacryl M ion-exchange and AcA 54 gel filtration column chromatography, and the properties of serine proteinase were characterized. By means of SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, the molecular weight of the enzyme was 55 kd. The optimal pH for the activity of purified enzyme was 7.5. The activity of the purified enzyme was completely inhibited by Di-isopropylfluorophosphate(DFP) and N-.alpha.-p-tosyl-L-lysine choloromethyl detone(TLCK) but not by other proteinase inhibitors such as E-64, pepstatin A, 1, 10-phenanthroline. The purified enzyme was capable of degrading type I and type IV collagen. Antisera obtained from hymans infected with Pseudomonas aeruginosa reacted to the purified serine proteinase in immunoblots. These results indicate that the purified enzyme is trypsin-like serine proteinase and this enzyme of P. aeruginosa may play an important role in tissue damage as a spreading factor and may be useful for serodiagnosis of Pseudomonas infections.

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식품첨가물(食品添加物)이 소화효소(消化酵素)의 활성(活性)에 미치는 영향(影響)(1) - 식품첨가물(食品添加物)이 Pancreatin의 Proteinase Activity에 미치는 영향(影響) - (Effects of Condiments upon Enzyme Activity (1) - Effects of Condiments upon Proteinase Activity of Pancreatin -)

  • 서명자
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제6권4호
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    • pp.55-60
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    • 1973
  • 0.2%에 Pancreatin Solution에 파, 생강, 마늘, 후추, 고추, 고초냉이, 겨자, 설탕, 등(等) 각종(各種) 식품첨가물(食品添加物)을 Homogenizer로 마쇄하여 0%, 1%, 5%, 10% 가(加)하여 $15^{\circ}C$에 저장하고 일정시간(一定時間)마다 이 효소액(酵素液)을 취(取)하여 Fuld Gross Method에 의(依)하여 Proteinase 역가(力價)를 측정(側定)하여 식품첨가물(食品添加物)이 Proteinase활성(活性)에 미치는 영향을 실험(實驗)하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 파 파를 0.2% Pancreatin Solution에 1%, 5%, 10% 첨가시(添加時)의 Proteinase 역가(力價)는 저장 3일(日) 까지는 control에 비(比)하여 75% 억제되고 저장 4일후(日後)에는 더욱 억제되어 저장 시일(時日)이 경과(經過) 함에따라 Proteinase활성(活性)이 더욱 억제 되었다. 2) 생 강 생강은 control에 비(比)하여 저장 24시간(時間)까지는 93% 억제한다. 그러나 저장시간(時間)이 경과(經過) 함에따라 효소작용(酵素作用)을 억제하는 기능(機能)이 감소되어 control에 비(比)하여 50% 정도(程度)로 Proteinase 활성(活性)을 억제한다. 3) 마 늘 마늘은 저장 24시간(時間)까지는 control에 비(比)하여 Proteinase활성(活性)이 87%정도(程度) 억제 되나 시일(時日)이 경과(經過) 함에 따라 효소(酵素)억제 작용(作用)이 감소되여 10일(日)째는 억제효과(效果)가 없어진다. 4)후 추 후추는 control에 비(比)하여 1% 첨가구(添加區)는 저장 3일(日)까지는 75% 억제되고, 저장 4일이후(日以後)는 50%로 억제 된다. 5%, 10% 첨가구(添加區)는 저장시간(時間)과 관계(關係)없이 Proteinase활성(活性)이 75%로 억제된다. 5)고 추 고추 1% 첨가구(添加區)는 저장 24시간후(時間後)에는 control에 비(比)하여 87% 억제되나 48시간(時間) 이후(以後)부터는 계속 75% 억제되었고, 10일(日)째는 50%로 억제된다. 5% 첨가구(添加區)는 저장 24시간후(時間後)부터는 87% 억제되고 7일(日)터는 Proteinase 활성(活性)이 75% 억제된다. 10% 첨가구(添加區)는 저장시간(時間)에 관계(關係)없이 control에 비(比)하여 87% 억제한다. 6)미 원 미원은 첨가(添加) 농도(濃度)와 관계(關係) 없이 2일(日)까지는 75% 억제되고 3일(日)에서 5일(日)까지는 50% 억제되었으나 7일(日)부터 는 Proteinase 활성(活性) 억제 효과가 없어진다. 미원은 저장시간이 경과함에 따라 Proteinase 활성(活性) 억제효과가 없어진다. 7)설 탕 설탕은 첨가(添加) 농도(濃度)에 관계(關係)없이 24시간후(時間後)에는 Proteinase 활성(活性)이 75% 억제되고 2일(日)째부터는 저장시간에 관계(關係)없이 계속 50% 억제된다. 8) 고초냉이 고초냉이는 저장 24시간째는 약(約) 95% 정도(程度)의 Proteinase 활성(活性)을 억제하나 2일(日)째 부터는 5%, 10% 첨가구(添加區)는 87% 억제하고 1% 첨가구(添加區)는 75% 억제되어, 고초냉이의 첨가농도(添加濃度)가 높을수록 Proteinase 활성(活性)이 억제된다. 9)겨 자 겨자는 저장시간과 별(別)로 관계(關係)없이 첨가농도(添加濃度)가 높을수록 Proteinase 활성작용(活性作用)을 억제하고 식품첨가물중(食品添加物中)에서 가장 높은 억제율을 나타내었다.

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Yarrowia lipolytica 504D의 Alkaline Proteinase 특성 (An alkaline proteinase produced by Yarrowia lipolytica 504D)

  • 김창화;진익렬;유춘발
    • 미생물학회지
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    • 제34권3호
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    • pp.82-86
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    • 1998
  • Yarrowia lipolytica 504D가 생산하는 alkaline proteinase를 정제한 결과, 분자량은 32,000으로 나타났고, pH 9.5와 $42^{\circ}C$에서 최적활성을 보였으며, pH 4-10의 범위와 $45^{\circ}C$까지 비교적 안정한 것으로 나타났다. PMSF를 비롯하여 EDTA, EGTA, phenanthrolin도 효소활성을 저해하여 정제효소가 serine proteinase인지 metal proteinase인지 불확실하였다. 그러나 28% 활성증가를 보인 $Cu^{2+}$ 외에 $Zn^{2+}$를 비롯한 대부분의 무기염들이 효소활성을 증가시키지 못하였고, 또한 EDTA의 첨가로 불활성화된 효소도 Ca 염의 첨가로 활성이 복원되었다. 따라서 정제효소는 serine proteinase(E.C. 3.4.21.14)로 추정되었다.

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Candida albicans의 Proteinase 및 Phospholipase 분비능과 구강상피세포 부착능과의 상호관계 (Correlative Relationship between Proteinase, Phospholipase Activity and Adherence to Buccal Epithelial Cells of Experimental Strains of Candida albicans)

  • 고춘명;김수기
    • 대한미생물학회지
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    • 제22권4호
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    • pp.403-411
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    • 1987
  • This study investigated whether a correlation exists between proteinase activity, phospholipase activity and adherence of Candida albicans to buccal epithelial cells by using of various strains isolated from oral cavity. The proteinase activity of 30 strains was tested by culture on agar media that contained bovine serum albumin as a nitrogen source. Using the serum-protein-agar method to test proterolysis of serum albumin in 20 strains of Candida albicans. Twenty-six strains of Candida albicans were phospholipase producers and the degree of phopholipase activity of experimental strains were $0.51{\sim}0.89$ measured by Pz-value. Twenty-eight strains of Candida albicans were adhersive to buccal epithelial cells and 15 strains were foung significantly active adherence. Fifteen strains of Candida albicans were correlated with proteinase activity and adherence to epithelial cells and concomitantly 20 strains of Candida albicans were also correlated with phospholipase activity and adherence. In conclusion our investigation provides evidence of a correlation between quantitative proteinase, phospholipase and adherence. An association of these parameters may be an important contributory factor for pathogenicity.

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