In 1997, a new disease on creeping bentgrass and Kentucky bluegrass occurred in the green and fairway of a few golf courses in Korea. The disease spread gradually throughout the country and became a threat to turfgrass management. Symptoms of the disease consisted of small, circular, and sunken patches sized 3~5cm in diameter. The disease named as a dollar spot following its characteristic symptoms of circular blight and bleach on the green. The disease peaked two times in a year from April to June and from late August to October and white cottony mycelia of the causal fungus developed on diseased turfs in the early morning when the conditions were favored. A causal fungus was consistently isolated from the infected tufgrass and seven isolates originated from seven golf courses located in six provinces were selected for further study. The fungus produced abundant white aerial mycelia on PDA and turned to dark gray or light brown as it aged. Width of the mycelium was ca. $5~8\mu\textrm{m}$. While sclerotia were not readily formed on the medium, scattered small and dark colored stromata were developed on the surface. The fungus grew well on PDA between 5 to $30^{\circ}C$ and maximally around $25^{\circ}C$. Based on investigated mycological and cultural characteristics, the causal agent of dollar spot was identified as Sclerotinia homoeocarpa. The fungus showed strong pathogenicity to several turfs as creeping bentgrass, Kentucky bluegrass, perennial ryegrass, tall fescues, and zoysiagrass.
동전마름병을 일으키는 Sclerotinia homoeocarpa는 한국에서 가장 일반적인 한지형 잔디 병원균이다. 경기도, 충청남도, 전라북도, 경상북도 등 다양한 지역에서 분리한 13개 균주로부터 유도된 nit 변이균주를 이용하여 의한 체세포화합성군(vegetative compatibility group, VCG) 평가가 이루어졌다. 돌연변이주는 질소동화작용에 근거하여 nit1, nit2, nit3, NitM 등 4가지 유형으로 분류되었다. 균주간에 돌연변이주 발생정도는 크게 차이가 있었으며 최대 15개의 변이주를 생산한 균주가 있는 반면에 전혀 형성하지 못한 균주도 존재하였다. 선택배지에서 4가지 돌연변이주 유형 중에 nit1과 NitM의 발생빈도(80%)가 높았으며, nit2와 nit3은 발생빈도가 매우 낮았다. 한 개의 큰 체세포화합성군 그룹과 4개의 작은 그룹이 18개 돌연변이주로부터 결정되었다. Nit 변이균주를 이용하여 의한 VCG 평가는 매우 효율적이었으며, 향후 한국의 Sclerotinia homoeocarpa균의 효율적 관리를 위한 생태학적 역학적인 면을 연구하기 위해서는 보다 많은 지역으로부터 분리된 균주의 평가가 필요하다.
위에서 골프장의 안양 중지 이병 잎에서 분리한 병원균인 달라스팟 유사 병원균을 분리 동정하였다. 2000년도 국내에 처음 보고된 이후 현재까지 뚜렷하게 진전된 연구가 보고 되지 않아 향후 사전 예방과 발생시 방제 법을 강구하기 위함과 아울러 코스관리자의 면밀한 관심을 유도하기 위하여 병원균 분리, 동정 및 특성을 한지형 잔디(Agyostis palustris Huds. cv Penncross)에서 발생하는 달라스팟 병원균과 비교 실험을 실시하였다. 1. 기존에 알려진 것처럼 Sclerotinia homoeocarpa 에서 보이는 온도에 대한 민감도를 새로운 병원성 Scz1 균주에서도 볼 수있어 특정온도에서의 생장억제는 안양 중지 달라스팟 병의 발병하는 시기뿐만 아니라 병방제관리에 도움이 될 것으로 생각된다. 2. 병원균 균사 특성에서 전자현미경사진으로는 구별하기 어려웠으나, PDA배지상에서의 Scz1와 Scz2 색상은 동일한 반면 Scb1균사색상과는 차이가 남으로 향후 간단하게 균사색상으로 식별이 용이 할 것이다. 3. 실험실상에서 병원균의 약제 민감도 측정결과는 이프로디온과 프로피코나졸 약제가 우수하였다. 4. 병 접종 실험을 통하여 분리된Sczl 균주가 안양 중지에 대한 기주 특이성을 보임으로 조이시아 달라스팟의 주요 병원균으로 밝혀졌다. 5. Scz1의 병원성은 안양 중지에 대한 기주 특이성이 높은 것으로 밝혀졌다.
Vegetative compatibility groups (VCGs) are determined for many fungi to test for the ability of fungal isolates to undergo heterokaryon formation. In several fungal plant pathogens, isolates belonging to a VCG have been shown to share significantly higher genetic similarity than those of different VCGs. In this study we sought to examine the relationship between VCG and genetic similarity of an important cool season turfgrass pathogen, Sclerotinia homoeocarpa. Twenty-two S. homoeocarpa isolates from the Midwest and Eastern US, which were previously characterized in several studies, were all evaluated for VCG using an improved nit mutant assay. These isolates were also genotyped using 19 microsatellites developed from partial genome sequence of S. homoeocarpa. Additionally, partial sequences of mitochondrial genes cytochrome oxidase II and mitochondrial small subunit (mtSSU) rRNA, and the atp6-rns intergenic spacer, were generated for isolates from each nit mutant VCG to determine if mitochondrial haplotypes differed among VCGs. Of the 22 isolates screened, 15 were amenable to the nit mutant VCG assay and were grouped into six VCGs. The 19 microsatellites gave 57 alleles for this set. Unweighted pair group methods with arithmetic mean (UPGMA) tree of binary microsatellite data were used to produce a dendrogram of the isolate genotypes based on microsatellite alleles, which showed high genetic similarity of nit mutant VCGs. Analysis of molecular variance of microsatellite data demonstrates that the current nit mutant VCGs explain the microsatellite genotypic variation among isolates better than the previous nit mutant VCGs or the conventionally determined VCGs. Mitochondrial sequences were identical among all isolates, suggesting that this marker type may not be informative for US populations of S. homoeocarpa.
Chemical management of dollar spot in turf may lead to the development of Sclerotinia homoeocarpa populations with reduced fungicide sensitivity. The objective of this study was to investigate resistance of S. homoeocarpa isolates to triazole fungicides and to test cross-resistance among three triazole fungicides. A total of 66 isolates of S. homoeocarpa were collected from 15 golf courses across Korea, and tested via in vitro sensitivity assay against hexaconazole, propiconazole and tebuconazole. $EC_{50}$ values of the isolates to these fungicides were distributed in the range of $0.001-1.1\;a.\;i.\;{\mu}g\;ml^{-1}$. Based on the $EC_{50}$ values, twelve representative strains were selected as sensitive isolates including control and insensitive isolates with respect to each fungicide. At a concentration of $0.1\;a.\;i.\;{\mu}g\;ml^{-1}$ for all fungicides, the selected strains were distinguished as sensitive or resistant isolates with the mycelial growth inhibition rate of 50% as the criterion. The $EC_{50}$ values of resistant strains exposed to hexaconazole, propiconazole and tebuconazole were 20-50 times, 50-70 times, and 77 times greater, respectively, than that of the control strains. Two isolates of S. homoeocarpa S0-41 and Sh14-2-1 showed sensitivity toward all the fungicides used, while two other isolates Sh7-5-1 and Sh2-1-1 showed resistance to all fungicides. Each isolate showed similar resistance to the three types of triazole fungicides, whereby cross-resistance of isolates was confirmed in the present study; all three triazole fungicide combinations displayed significant correlation coefficients equivalent to or greater than 0.8.
Antifungal activity of 20 chemicals registered to turfgrass diseases was evaluated. Among the chemicals, iprodione, benomyl, iprodione+thiram, pencycuron+tebuconazole, hexaconazole, and iprodione+thiophanate-methyl exhibited high antifungal activity to the dollar spot fungus. All isolates were greatly inhibited by the chemicals at the concentration over 32ppm($\mu\textrm{g}$/ml). However, sensitivity of the isolates to chemicals was varied at the lower concentration as 8 and 16 ppm as follows. The isolate originated from Ora golf course was resistant to iprodione and iprodione+thiophanate methyl, Gonjiam isolate to iprodion, Youngpyung isolate to iprodione+thiram, and Dogo isolate to iprodione+thiram, pencycuron+tebuconazole, and tebuconazole. It was found from this study that the varied chemical resistance among the isolates was positively related to the application time of the chemical in the golf course. Consequently, when a chemical was applied more often times than the others to the golf course, the fungal isolates originate from the field showed higher resistance to the former chemical. Effects of the chemicals on control of the dollar spot was evaluated in the field. All tested chemicals revealed over 70% disease control efficacy, however, mepronil+propiconazole was the best showing 83% control efficacy and followed by fenarimo, iprodione, terbuconazole, thiram, and thiophanate-methyl.
난지형 잔디인 한국 안양잔디에서 달라스팟의 병원균인 Sclerotinia honoeocarpa의 isolate, Scz1이 최근 새롭게 동정되었다. Scz1은 한지형 잔디인 크리핑 벤트그래스에서 분리된 표준 균주인 Scb1과는 다른 균사의 색상, 균사간의 친밀도 그리고 병 기주 특이성을 가지는 것으로 알려졌다. 본 연구에서는, Scz1, Scz2(난지형 잔디에서 분리한 또 다른 달라스팟 병원균) 그리고 Scb1을 분자생물학적인 연구, internal transcribed spacer(ITS) 와 random amplified polymorphic DNA(RAPD) assays를 이용하여 동정 및 유전자적 차이를 알아보았다. ITS 실험의 결과, 3개의 isolates가 ITS 부분적 염기 서열 비교 BLAST에 등록되어 있는 S. homoeocarpa의 ITS 염기 서열과 $94{\sim}97%$의 동일성을 지니는 것으로 밝혀졌다. RAPD 실험 결과로는, Scz1과 Scb1의 similarity matrix 범위는 0.167이였고, Scz2와 Scb1은 0.139 그리고, Scz1과 Scz2은 0.713이였다. 계통수(系統樹) 결과는 Scb1과는 달리 Scz1과 Scz2는 유전적으로 높은 동일성을 지니고 있어, 같은 분류에 속한다는 것을 알 수 있었다. 달라스팟 병원균 억제에 효과적인 농약인 프로피코나졸에 대한 $EC_{50}$은 Scz1은 0.012 ${\mu}g/ml$, Scz2은 0.003 ${\mu}g/ml$ 그리고 Scb1은 0.030 ${\mu}g/ml$이었다. 상기 결과로, 동일 병원 기주성과 유사한 유전적 친밀성을 보인 Scz1과 Scz2는 S. homoeocarpa의 동일 그룹에 속하였으나 농약 민감도에서는 차이점을 보였다는 것을 알 수 있었다. 향후, 보다 더 많은 한지형과 난지형 잔디에서 분리된 병원균들을 이용하여 유전적 다양성을 밝히는 연구가 진행되어야 할 것이다.
동전마름병은 Sclerotinia homoeocarpa가 원인균으로 주로 한지형 잔디에 발생하는 주요 병이다. 본 연구는 이쑤시개를 이용하여 동전마름병 전염원 검출과 처리물량을 달리하여 약제 살포하였을 때 병원균 검출 특성을 조사하기 위하여 수행하였다. 동전마름병 병원균을 검출한 결과 병반 중심의 잎 부위에서는 100% 검출되었으며, 대취 부분에서는 83.3%가 검출되었으나 토양에서는 전혀 검출되지 않았다(대취층 아래 1, 2와 3 cm). 병반 중심부와 가장자리에서는 100% 검출되었으며 병반으로부터 1.5 cm 떨어진 부분에서는 13% 검출되었으며 병반으로부터 3와 4.5 cm 떨어진 부분에서 병원균의 분리빈도는 각각 3와 0%로 나타났다. 동전마름병 병원균은 병반으로부터 1.5 cm 떨어진 지점의 잎과 대취에서는 73.3%와 20%가 검출되었으며 3 cm 떨어진 부분과 4.5 cm 떨어진 부분에서 각각 46.6%와 13.3% 병원균이 검출되었다. 토양부분에서는 병원균이 검출되지 않았으며 전염원 검출 빈도는 병반으로부터 멀어질수록 낮아지는 경향이었다. 두 가지 약제를 같은 약량으로 2.26와 6.78 L의 물에 희석하여 처리한 결과 병원균 검출빈도는 Chlorothalonil (CH) 처리구보다 Propiconazole (PP) 처리구에서 높게 나타났다. 병반중심부에서 CH의 경우 검출 빈도는 15.5%로 PP의 경우 20.5%로 나타났다. 잎에서는 CH약제 처리구는 각각 15.5%와 2.2%가 검출되었으며 PP 처리구에서 이보다 높은 20.5%와 4.4%가 검출되었다. 대취층에서 전염원은 CH 처리구에서 물 2.26 L와 12.7%로 물 6.78 L가 2.2%로 검출되었다. 가장자리에서는 잎 부분을 검출한 결과 CH의 경우 물 2.26 L 처리구에서는 2.7%로 물 6.78L에서는 검출되지 않았으며 PP의 경우 물 2.26 L에서 9.4%로 물 6.78L에서는 CH 처리구와 같이 검출되지 않은 것으로 나타났다. 이쑤시개 방법은 빠르고 쉽게 동전마름병을 검출하여 전염원의 분포 조사 및 전염원 형성 예측을 할 수 있는 방법으로 제안한다.
Sclerotinia homoeocarpa F.T. Bennett에 의한 동전마름병은 북미에서 가장 흔하며 경제적으로 중요한 잔디병이다. 동전마름병을 관리하기 위해서는 봄부터 가을까지 잦은 약제처리를 요구한다. 본 연구에서는 동전마름병에 대한 농약의 단용 혹은 다른 약제와의 혼용 처리를 통해 약제의 효과를 평가하고, Rhizoctonia solani에 의한 브라운 패치(brown patch)와 Pythium aphanidermatum에 의한 피시움마름병에 대한 이차 방제효과(secondary effect)도 조사하였다. 평가기간동안 동전마름병은 유리한 기상조건으로 인하여 평가하기에 적당한 병 발생을 보였다. 처리한 살균제 중 Rhapsody 단용처리를 제외한 모든 살균제의 단용 혹은 혼용처리에서 동전마름병에 대한 유의성 있는 방제효과가 인정되었다. 또한 동일한 처리구에서 브라운 패치에 대한 병 방제효과도 인정되었다. 모든 살균제에서 약해는 관찰되지 않았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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