Bovine piroplasmosis caused by Theileria sergenti is a major cause of economic loss in livestock industry. Five cattle infected with Theileria sergenti showing severe and fatal anemia, confirmed by indirect immunofluorescent assay(IFA), were used in this study. Four cattle were treated with diminazene aceturate and one was not treated as the control. The therapeutic effect of diminazene aceturate against Theileria sergenti infection was monitored by detecting the 32kDa polypeptide specific for Theileria sergenti by the western blotting with both polyclonal and monoclonal antibodies. The 32kDa polypeptide detected at the beginning of diminazene aceturate treatment was not detectable after the treatment. It is postulated that the detection of the 32kDa polypeptide specific for Theileria sergenti may be a good tool for the diagnosis and monitoring the treatment progress of Theileria sergenti infection.
소 림프구내의 Theileria sergenti감염을 확인하기 위하여 T. sergenti감염혈액에서 림프구를 분리한 후 중합효소연쇄반웅을 실시하였다. 또한,분리한 림프구내의 T. sergenti감 염을 증명하기 위하여 IFA test와 acridine orange stain을 실시하였다. 그 결과 다음과 같은 성적을 얻을 수 있었다. T. sergenti 감염헐액의 전혈과 림프구를 각각 생리식염수로 2배율 연 속회석하여 중합효소연쇄반응을 실시한 결과, 림프구내에서는 1,024배 회석배율까지 T. sergenti의 genomic DNA가 중폭되었으며, 전혈내에서는 256배 회석배율까지 증폭되었다. 그리 고 중합효소연쇄반응으로 T. sergenti 감염이 확인된 림프구를 이용하여 IFA test와 acridine orange 염색을 실시한 결과, 림프구내에 T. sergenti가 존재하는 것을 증명할 수있었다. 한편, 중합효소연쇄반응을 이용한 림프구내의 T. sergenti 감염의 진단 유용성을 확인하기 위하여 전 북지역에서 사육중인 소 16두를 대상으로 이들의 혈액으로 PCR 증폭을 실시하였다. 그 결과 전혈에서 genomic DNA를 취한 경우에는 3두(18.8%)만이, 그리고 림프구에서 genomic DNA를 취한 경우에는 11두(68.8%)의 소에서 T. sergenti DNA의 증폭을 관찰할 수 있었다.
Theileria spp.의 생활환에 대해서는 여러종류의 책을 통해서 잘 소개되어 있다. 그중 Theileria spp.의 분열소체 즉, merozoite는 주로 숙주의 적혈구내에 존재하는데 진드기에 의해 흡혈되지 않으면 더이상 발육하지 못하고 생을 마감한다고 여겨 왔다. 그러나 적혈구내 merozoite가 임파구에 다시 들어가 schizont로 복귀하여 분열 증식된다는 가설은 아직까지 증명된 바 없다. 본 실험은 T sergenti merozoite의 schizont로의 복귀를 입증하고자 수행되었다. T sergenti에 감염되지 않은 3개월령의 송아지를 비장적출시킨 후 T sergenti merozoite에 감염된 순수적혈구를 인공감염시켰다. 인공감염후 경시적으로 혈액과 임파액을 채취하여 적혈구내 T sergenti 감염을 조사하고 백혈구 감별혈구를 계산하였으며 임파구내 schizont 출현을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 혈구내원충 감염율(parasitemia : PE)은 인공감염후 28일째 최고치인 10.5%를 보였으며 그후 5%이내의 수준을 유지하다가 70일째 다시 8.5%의 상승점을 보였다. 2. 백혈구 감별혈구계산에서는 감염초기에는 호중구가 주종을 이루다가 감염후 19일을 기점으로 임파구(60~80%)가 급격히 증가하여 실험종료 때까지 유지되었다. 3. 인공감염후 19~23일, 59~63일 사이에 말초혈액내 임파구에서 분열 증식하고 있는 schizont를 관찰할 수 있었다. 4. 인공감염후 7일부터 림프액내 임파구의 크기가 커지면서 blast-formation이 진행되었으며 실험종료때까지 유지되었다. 이상의 결과로 보아 적혈구내 merozoite가 임파구에 다시 들어가 schizont로 복귀하여 분열 증식함을 입증하여 기존의 T sergenti 생활사는 수정되어야 된다고 사료된다.
소 theileriosis의 태반감염 사실을 입증하기 위하여 Theileria sergenti에 자연감염된 암소의 비장, 태반 그리고 유산된 태자의 비장과 태반조직으로부터 T sergenti를 면역화학적으로 검색 입증하고자 T sergenti 표피의 34KD 항원의 단크론 항체를 활용하여 avidin biotin complex 방법으로 면역화학적으로 염색하였던 바, 이들 formalin 고정 조직표본에서 T sergenti의 특이 항원성 물질을 관찰함으로써 태반감염을 증명할 수 있었다.
A splenectomized 5-month-old calf was inoculated with cryopreserved Theileria sergenti infected blood originated from naturally infected Korean native cattle in Chonbuk district. At peak parasitemia (40.1%), blood was collected, washed, lysed and then the T sergenti merozoite was isolated by differential centrifugation. Antigenic profile of isolated T sergenti organism was analized by SDS-PAGE and western blotting techniques. Coomassie blue stained SDS-PAGE gel revealed at least twelve protein bands of approximately 14Kd, 28Kd, 30Kd, 34Kd, 36Kd, 38Kd, 41Kd, 56Kd, 66Kd, 72Kd, 97Kd and 116Kd in the merozoite homogenate. In western blot, although T sergenti antigen recognized by specific anti-T sergenti antibodies demonstrated 28Kd, 30Kd, 38Kd, 56Kd, 58Kd, 66Kd, 97Kd and 116Kd proteins. False positive reactions were also observed in normal bovine serum with T sergenti and normal erythrocytic antigens. Therefore, predominant proteins of T sergenti merozoite antigen were found to be 28Kd, 30Kd, and 41Kd proteins of molecular weights. On going studies we will analyze the relative importance of those antigens for immunity of T sergenti in Korean native cattle.
The life cycle of Theileria sergenti(T sergenti) in cattle, especially Korean native cattle, was not proved clearly. To find schizont stage in the life cycle of T sergenti in Korean cattle, T sergenti schizonts in the cells of parotid lymph nodes from 10 adult Korean cattle were examined. Lymphoid cells which were separated from these lymph nodes were cytocentrifuged to observe the parasites in the cells. T sergenti schizonts were detected in the cells of lymph nodes of 6 cattle out of them by IFA(Indirect Fluorescent Antibody) test and Giemsa stain. By peroxidase stain, the cells which contain schizonts were proved lymphoid cells. T sergenti schizonts identified by IFA test were able to be restained by Giemsa stain. Also, merozoites were observed in peripheral blood of the same 6 cattle that had schizonts, by giemsa stain, but not observed in the 4 cattle that had not been detected schizonts. As a part of life cycle of T sergenti, schizonts were observed in the lymphoid cells of Korean cattle.
The rate of 58 neonatal calves in infection of Theileria sergenti was investigated in random samples on the farms located in Kyunggi, Chonbuk districts of Korea. 1. The criteria used in veryfying infection with T. sergenti included the detection of parasites by giemsa stain and acridine orange stain in the blood smear slides. 2. Further evidence of current or previous exposure to T. sergenti was based on demonstration of T. sergenti specific antibody and antigen by the western immunoblot and the directed immunofluorescent antibody test in the peripherial blood of the calves. 3. The prevalence rates were 35%, 50% in Kyunggi, Chonbuk provinces respectively and the overall prevalence in all the farms was 43.2% by means of acridine orange stain. 4. The parasites that were observed in the peripherial blood of calves was showen surely by the western immunoblot to the characteristic 34KD antigen among the proteins of T. sergenti (Korean isolate). 5. And the antigen of the neonatal calves reacted at the very highest titer(1 : 2, 560) 6. These data highlight the significances of T. sergenti in the neonatal calf disease in Korea.
Bovine piroplasmosis caused by Theileria sergenti results in economic loss in the dairy industry. The majority of calves infected with T. sergenti in Korea harbor mixed populations with Buffeli, Chitose and Ikeda types. The T. sergenti types of the infected calves were examined to evaluate the effects of diminazene aceturate on their infection. To confirm the type of the T. sergenti infection, the allele-specific PCR was performed with the erythrocyte specimen from the 5 naturally infected calves. The dfferent allele-specific genes encoding the p32, p33 and 34, the immunodominant piroplasmin surface proteins, were amplified using the 3 sets of the oligonucleotide primers by PCR. The calves were treated with diminazene aceturate at the dose of 2mg/kg once intravenously and monitored for 12 months at one month intervals by the allele-specific PCR. Diminazene aceturate did not effect the Ikeda type infection. But diminazene aceturate effected the Chitose and Buffeli type infection reducing T. sergenti parasitemia. It is postulated that diminazene aceturate may effect the infection of the Chitose and Buffeli types, but not that of Ikeda type.
The fine structure of the inoculated Theileria sergenti on the splenectomized Korean native cattle was observed to delineate the morphological. characteristics with transmission and scanning electron microscope. The cattle was inoculated with 1.5ml cryopreserved stabilate ($5.63{\times}10^6/{\mu}l$, PE 3%). At peak parasitemia (40%), infected blood was collected, washed and then T sergenti was observed. Scanning electron micrograph of the erythrocytes infected with T sergenti appeared various irregular from involving specific swelling, and abnormal projections like acantocyte, echinocyte and knizocyte. Transmission electron microscopic studies of T sergenti showed that piroplasm possess intracytoplasmic food vacuole, rhoptries and tubule. Merozoite, $0.6{\sim}1.81{\mu}m$ to $0.4{\sim}1.21{\mu}m$ in length, surrounded by 10~15nm thickness of pellicula. which is surrounded by a single unit membrane. Various size of veil which was observed in stroma of erythrocytes infected with T sergenti, located at the proximate part of the merozoite. The merozoite multiplied by means of binary fission so that two and more oval-like merozoites in the stroma of infected erythrocyte could be observed.
Jin-ho Park;Seung-ok Lee;Joon-seok Chae;Oh-deog Kwon;Joo-mook Lee
한국임상수의학회지
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제16권2호
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pp.328-331
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1999
Theileriosis에 대한 효율적인 예방대책을 마련하기 위한 일환으로 발현된 T. sergenti 재조합 항원단백질의 면역원성을 조사하였다. 먼저, E. coli 단백질 발현 vector인 pQE 32 plasmid vector를 이용하여 발현된 T. sergenti의 재조합 막표면단백질(KTs-MP)을 4개월령의 유우 송아지에 접종하였다. 그리고 접종된 송아지의 혈액변화상과 T. sergenti에 대한 항체가의 변화상을 분석한 결과, 재조합단백질의 접종에 의하여 항체가가 상승되는 것을 알 수 있었다. 그러나 재조합단백질의 접종만으로는 T. sergenti의 감염을 완전하게 예방하지는 못하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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