• 한국식품위생안전성학회지
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• 제6권3호
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• pp.111-117
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• 1991

가축사료중 zearalenone 분석을 위한 enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) 법의 개발을 위해 우선 zearalenone의 항원성을 증폭시키기 위해 zearalenone oxime 유도체를 합성한 다음 bovine serum albumin(BSA)와 conjugate를 만들고, 이를 항원으로 토끼에 면역시켜 11주에 zearalenone에 특이한 항체를 얻어냈다. 생성된 항체를 zearalenone외에 ${\alpha}-zearalenol$과는 강한 cross reactivity를 나타내었고 ${\beta}-zearalenol,\;{\alpha}-zearalenol\;및\;{\beta}-zearalenol$과는 약간의 반응을 보였으며 확립된 ELISA 조건은 당므과 같다. 먼저 시료를 methanol-phosphate buffered saline-dimethyl formate(70 : 29: 1)을 4배 첨가하여 blending 한 다음 Whatman No. 4를 통한 여액을 ELISA시료로 사용하였다. 효소 반응시간과 발색시간은 각각 $37^{\circ}C$에서 30분과 15분이었고, 흡광도는 410nm에서 ELISA reader로서 측정하였으며, 측정한계는 1~100 ppb로 매우 낮았다. 확립된 ELISA 조건으로 실제시료의 zearalenone오염도는 측정결과 24개 시료 중 4개의 시료가 양성반응을 보였고 그 함량범위는 $3.93~7.43\;\mu\textrm{g}/kg$이었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제13권4호
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• pp.419-424
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• 1998

Zearalenone 검출을 위하여 Z-M-26 hybridoma cell을 mouse의 복강에 투여한 후 생산, 정제한 항체와 합성한 Zearalenone-oxime-OVA conjugate를 이용하여 ELISA법을 확립하였다. Carbonyl buffer로 희석한 Zearalenone-oxime-OVA conjugate를 4$^{\circ}C$에서 하룻밤 coating 하고 1% BSA용액으로 하룻밤 blocking한 다음, 1,000배 희석한 항체를 Zearalenone 또는 시료와 혼합하여 하룻밤 반응시키는 것이 효과적이었다. 또한 2차 항체와 기질용액의 반응시간은 각각 1시간, 30분이 적당하였고, 발색된 반응액 450nm에서 측정하였다. 이 분석법의 결과 0.1~100 ppb의 Zearalenone이 측정 가능하였으며, 본 실험에서 확립한 indirect competitive ELISA법은 농산물 중 Zearalenone 분석에 효과적으로 활용할 수 있으리라 생각된다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1409-1414
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• 1998

Zearalenone에 특이한 단크론성 항체를 개발하기위하여 형질세포종세포인 myeloma cell $(P3{\times}63Ag.V653)$과 zearalenone-oxime-bovine serum albumin (BSA) 결합체를 항원으로 면역시킨 BALB/c female mice의 비장세포를 융합시켜 hybridoma cell을 생산하였다. 그들의 항체가를 indirect competitive ELISA법으로 측정한 결과 zearalenone에 대하여 높은 친화력을 갖는 5세포주를 얻었다. 그중 Z-2-M26 hybridoma cell line이 생산하는 단크론성항체는 특히 zearalenone과 민감하게 반응하였고, ${\alpha}-zearalenol$과도 약간의 교차반응을 보였으나 ${\beta}-zearalenol,\;{\alpha}-zearalenol,\;{\beta}-zearalenol$ 및 DON과는 거의 반응하지 않았다. 따라서 본 실험에서 개발된 항체는 앞으로 zearalenone에 대한 민감하고 정량적인 효소면역측정법의 개발을 위한 중요한 면역시약으로 사용될 것으로 생각한다.

• 대한수의학회지
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• 제38권2호
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• pp.297-303
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• 1998

For the extraction and measurement of zearalenone in the corn, bean, wheat and barley contaminated with Fusarium graminearum, the zearalenone-oxime, zearalenone-oxime BSA and zearalenone monoclonal antibodies were studied to develop and apply the direct competitive enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The extraction range of zearalenone with the monoclonal antibodies produced in this experiment was 10ng to 500ng/g feed and the 50% inhibition value was 50ng/ml. The mean recoveries of zearalenone artificially spiked in the ground corn were 89%. The specificity of F-2 monoclonal antibody for the analogues was favorable for the direct competitive ELISA. The result of the experiment showed the zearalenone in the corn, bean, wheat and barely naturally contaminated with the mold would be suitable for extraction and measurement with the monoclonal antibodies.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권1호
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• pp.7-10
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• 1993

ELISA법을 zearalenone 생성균주 검색에 응용하였다. 먼저 zearalenone에 대한 항체를 500배 희석한 후 microtiter well에 $125\;{\mu}l$씩 주입하여 $40^{\circ}C$에서 overnight시켜 coating하고, 시료용액과 enzyme을 $37^{\circ}C$에서 30분간 반응시켰다. 배양후 washing buffer로 6회 세척한 다음 plate에 2,2'-azino-di-3-ethyl-benzthiazoline sulfonic acid(ABTS) 용액을 $100\;{\mu}l$씩 첨가하여 15분간 발색시킨 다음 반응 정지액 $100\;{\mu}l$씩을 가해 반응을 정지시키고 ELISA Reader로서 흡광도(410 nm)를 측정하였다. 그 결과 zearalenone 생성이 확인된 19 균주 중 분리균 R-5, C-46 및 S-134가 50 ng/ml 이상의 zearalenone을 생성하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권4호
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• pp.339-345
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• 2002

가지에서 분리한 F. equiseti FO-68균주와 벗풀에서 분리한 Fusarium sp. FO-510균주로부터 항균물질을 분리한 후 이들의 식물병원곰팡이에 대한 항균활성을 in vitro및 in vivo에서 조사하였다. FO-68균주의 쌀배양체로부터 하나의 항생물질을 순화하였는데 , 이 물질은 equisetin이라는 물질로 동정되었다. 그리고 FO-510균주의 쌀배양체로부터는 두 개의 항균활성 물질을 분리하였는데, 이들은 zearalenone과 8'-hydroxyzearalenone으로 동정되었다. Equisetin과 zearalenone은 in vitro에서 실험한 식물병원곰팡이 대부분에 대해서 높은 항균활성을 보였지만, 8'-hydroxyzearalenone은 거의 항균활성이 없었다. In vivo assay에서 equisetin은 토마토ㆍ잿빛곰팡이병과 토마토ㆍ역병에 방제효과가 컸으며, zearalenone은 벼ㆍ도열병, 벼ㆍ잎집무의마름병, 토마토ㆍ잿빛곰팡이병 및 토마토ㆍ역병에 대하여 효과를 나타내었다. 하지만 8'-hydroxyzearalenone는 토마토ㆍ잿빛곰팡이병을 제외한 나머지 식물병의 발생은 억제하지 못했다. Equisetin, zearalenone 및 8'-hydroxyzearalenone의 항진균활성은 본 논문에서 처음으로 보고하는 바이다.

• 한국식품과학회지
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• 제24권6호
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• pp.581-585
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• 1992

영남지방으로부터 백미(60), 보리쌀(52), 대두(45), 땅콩(33), 옥수수(32), 메주(27), 벼(40), 보리(54) 및 토양(32) 등 총 375종의 시료를 수거하여 Fusarium속으로 추정된 균주를 분리하고, 분리균을 고체배지에 접종하여 배양(14일, $30^{\circ}C$)한 후에 zearalenone 생성균주를 선별한 결과는 다음과 같다. 375종의 시료에서 302주의 Fusarium속을 분리하였고, 분리된 302주를 고체배지에서 배양한 다음 TLC와 HPLC법에 의해 zearalenone 생성균주를 선정하였다. TLC 결과에서 zearalenone 생성균주는 29주 [쌀(3), 메주(2), 옥수수(1), 보리쌀(5), 토양(4), 땅콩(3), 대두(4), 보리(5) 그리고 벼(2)]로 나타났으나, HPLC 분석결과 19주 [쌀(2), 메주(1), 옥수수(1), 보리쌀(4), 토양(3), 대두(2), 보리(3) 그리고 벼(3)]가 zearalenone 생성균주로 확인되었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제9권1호
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• pp.1-13
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• 1994

A Simultaneous determination method was improved for the determination and confirmation of zeranol, zearalenone, as well as their isomers and metabolites, in beef. The analytes were extracted from tissue by CH3CN, hydrolyzed enzymatically(for glucuronide conjugates), cleaned up by a strong basic anion exchange resin combined with a liquid/liquid partitioning, derivatized using MSTFA and confirmed, quantified by GC/MS/SIM with a internal standard, zearalane. The results were as follows : (1) all the estrogens were separated on the GC/MS chromatogram under the extraction method and the chromatographic conditions improved, the retention times of zearalane-TMS2, zearalanone-TMS2, zearalenone-TMS2, zeranol-TMS3, taleranol-TMS3, and $\alpha$-zearalenol-TMS3, $\beta$-zearalenol-TMS3, were 18.49, 19.44, 19.63, 19.71, 19.79 and 19.99, 20.08 minutes, respectively. (2) The calibration curves of residual zeranol, zearalenone and their metabolites showed constantly linear(r=0.99) in the range of 5~20 ng. The minimum detection concentration of residual zeranol, zearalenone and their metabolites was 1 ppb. (3) The total average recovery of residual zeranol, zearalenone and their metabolites from spiked beef was 60.2%(CV=29.7%) at the 1 ppb and 63.5%(CV=26.5) at the 2 ppb, 72.9%(CV=18.2%) at the 4 ppb. (4) The preservation method for 6 estrogens was improved for the fast running time(21 min) and MSTFA was utilized for derivatizing 6 estrogens for improvement of recovery, for good resolution, for characteristic mass spectra unlike Jose's method and Tina's method. The utilization of zearalane as internal standard showed good quantification result for zeranol, zearalenone, as well as their isomers and metabolites, in beef.

• The Plant Pathology Journal
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• 제22권3호
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• pp.215-221
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• 2006

Gibberella zeae (anamorph: Fusarium graminearum) is an important pathogen of cereal crops. This fungus produces a broad range of secondary metabolites, including polyketides such as aurofusarin (a red pigment) and zearalenone (an estrogenic mycotoxin), which are important mycological characteristics of this species. A screen of G. zeae insertional mutants, generated using a restriction enzyme-mediated integration (REMI) procedure, led to the isolation of a mutant (Z43R606) that produced neither aurofusarin nor zearalenone yet showed normal female fertility and virulence on host plants. Outcrossing analysis confirmed that both the albino and zearalenone-deficient mutations are linked to the insertional vector in Z43R606. Molecular characterization of Z43R606 revealed a deletion of at least 220 kb of the genome at the vector insertion site, including the gene clusters required for the biosynthesis of aurofusarin and zearalenone, respectively. A re-creation of the insertional event of Z43R606 in the wild-type strain demonstrated that the 220-kb deletion is responsible for the phenotypic changes in Z43R606 and that a large region of genomic DNA can be efficiently deleted in G. zeae by double homologous recombination. The results showed that 52 putative genes located in the deleted genomic region are not essential for phenotypes other than the production of both aurofusarin and zearalenone. This is the first report of the molecular characterization of a large genomic deletion in G. zeae mediated by the REMI procedure.

• 한국식품과학회지
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• 제40권3호
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• pp.354-359
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• 2008

국내유통 중인 대두, 붉은콩, 검은콩 녹두 등 6품목의 두류 총 127건을 immunoaffinity column 정제방법 및 HPLC-FLD을 이용하여 제랄레논에 대한 오염실태를 조사하였다. 상관계수($R^2$) 0.999 이상으로 양호한 직선성을 보였고 검출한계 및 정량한계는 각각 2.0 ${\mu}g/kg$, 6.0 ${\mu}g/kg$, 회수율 82.2-98.4%로 나타났다. RSD가 0.82-6.40%로 양호한 재현성을 나타내었다. 모니터링 결과, 대두(백태) 27건 중 1건(3.7%)에서 37.62 ${\mu}g/kg$ 검출되었고 붉은콩(팥) 27건 중 12건 검출되어 44.4%의 검출율을 보였고 그 오염수준은 8.01-38.98 ${\mu}g/kg$이었다. 나머지 시료 검정콩 16건, 녹두 24건, 서리태(속청) 19건, 서목태(약콩) 14건에서는 모두 검출되지 않았다. 따라서 총 시료 127건 중 13건 검출되어 10.2%의 검출율을 보였고 그 오염수준은 8.01-38.98 ${\mu}g/kg$이었다, 검출시료 13건을 LCMS/MS로 확인한 결과 모두 제랄레논임이 확인되었다. 본 연구결과에서 나타난 두류의 검출빈도 및 오염수준은 유럽연합에서 설정된 기준규격 이하의 수준이었으나 곰팡이독소의 생성의 특이성을 고려한다면 지속적이고 광범위하게 오염실태 조사가 되어야 한다고 판단된다.