A survey of virus infection in garlic plants cultivated in Korea was conducted for three years. Most virus-infected garlic plants (Allium sativum) showed typical symptoms on the leaves such as yellow mosaic, stripes, and distortion. Through immunosorbent electron micro-scopy and RT-PCR analysis, the complex mixtures of viruses including garlic viruses of the genus Allerivirus, gaylic strain of Leek yellow stripe virus of the genus Potyvirus, and Garlic latent virus of the genus Carlavirus were identified in the virus-infected garlic plants. Among these viruses, Allexivirus was the most frequently detect-ed in the regions surveyed. Using sets of differential primers for Allexivirus genomes, two members of the genus were amplified and sequenced from the purified viruses. The deduced amino acid sequences for the coat proteins and the nucleic acid binding proteins of two viruses showed high homologies to Garlic virus A (CarV-A) and Garlic virus D (GarV-D) of Allekivirus. This is the first report of GarV-A and GarV-D in Korea. This suggests that Allexivirus in gavlic plants in Korea was mixed and varied. Phylogenetic analyses showed that the genus Allexivirus was diversi(ied by the processes of accumulation and evolution of viruses in garlic plants due to the long period of repeated vegetative propagation.
Many cloves of native cultivated garlics in Korea were found to be infested by mites when observed with stereo-microscope. The mite was identified by light and scanning electron microscopic observation as Aceria tulipae. Surveying viruses from the vegetatively propagated garlic, highly flexuous, filamentous particles (700∼800 nm) were detected in Aceria tulipae, local lesions of Chenopodium murale after sap transmissions, mosaic garlic leaves inoculated with mite-borne virus by transmission of Aceria tulipae and naturally infected garlic leaves. The mite-borne virus isolated did not react with antisera of aphid-borne potyviruses (LYSV-G, LYSV-L, WoYSV) or carlavirus (GLV), but reacted with antisera of garlic mite-borne viruses (GV-C, GMbMV). In ultratin sections of mite-borne virus infected garlic tissues, aggregates of virus particles and membrane proliferations were found in the parenchyma cells, but cytoplasmic cylindrical inclusions were not observed. Heavily mite-infested plants showed streaking and malformation due to mite feeding. The mite-borne virus was identified as garlic mite-borne mosaic virus (GMbMV), the mite-borne genus Rymovirus of the Potyviridae by mite transmission, morphology of virus particles, serological relationships, host range, distribution pattern of virus particles and inclusion bodies in the infected cells. The results demonstrate that mite-borne virus is one of the major viruses infecting native cultivated garlic plants showing mosaic or streak symptoms in Korea.
현재 우리나라에서 재배되고 있는 마늘은 오랜 세월에 걸쳐 바이러스 감염에 무방비상태로 방치된채 영양번식을 계속해 왔기 때문에 대부분의 품종들이 퇴화되어 있을 것으로 생각된다. 따라서 마늘의 단위수량과 질의 향상을 기하기 위해선 바이러스 무감염 씨마늘의 육성, 보급에 의한 품종경신이 불가피할 것으로 보인다. 본 연구는 우리나라 마늘 재배지대 전역에서 가장 많이 발생하고 있는 모자이크병을 대상으로 바이러스의 분리, 검정식물상의 반응, 전염방법, 물리적성질, 순화방법, 혈청학적반응 및 형태등을 조사함과 동시, 마늘 모자이크 바이러스의 적절한 검정방법을 구명하여 앞으로 바이러스 무감염 씨마늘을 육성, 보급하는데 필요한 기초자료를 얻을 목적으로 실시했으며 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 1970-1972년까지 3년간 전투의 주요 마늘재배지대를 조사한 바 우리나라에서 재배되고 있는 마늘의 거의 대부분이 모자이크병에 걸려있음이 관찰되었다. 2. 마늘 모자이크 바이러스는 Chenopodium amaranticelor에 즙액접종 함으로써 단일계통을 분리할 수 있었다. 3. 26종의 검정식물을 공시하여 마늘 모자이크 바이러스를 즙액접종한 결과, 접종 11-12일 후에 Chenopodium amaranticolor, C. quince, C. album, C. koreanse 등 4종 식물의 접종엽상에 r국부병반 반응이 나타났다. 나머지 식물들에서는 병징이 나타나지 않았을 뿐 만 아니라 C. amaranticolor에 역접종했을 때도 바이러스는 회수되지 않았다. 4. 즙액접종에 의해 국부병반 반응이 나타날 상기 4종 Chenopodium속 식물중에서 C. amaranticolor 와 C. quinoa는 반응이 설민하고 정확하기 때문에 마늘 모자이크 바이러스의 검정식물로 적당하다고 생각된다. 5. 감염주에서 유내한 종구와 주아는 모두 모자이크 바이러스에 감염되어 있었고 이들 감염종구와 주아를 통하여 $100\%$ 전염되었다. 6. 마늘 모자이크 바이러스는 감염종구와 주아의 즙액에 의해서도 C. amaranticolor에 기계적 전염이 되었다. 7. C. amaranticolor 상에 계통분리된 마늘 모자이크 바이러스의 내열성은 $65^{\circ}-70^{\circ}C$, 희석한계는 $10^{-}2-10^{-3}$, 그리고 보존한계는 2 일이었다. 8. 마늘 모자이크 바이러스의 순화는 2회의 분획원심과 Sephadex gel filtration에 의해서 가능했다. 9. 전자현미경하에서 관찰한 마늘 모자이크 바이러스는 길이 1200-1225mu 폭 10-12mu의 사상이었다. 10. 혈청학적 미량침강 반응법에 의해 마늘잎에서뿐만 아니라 인편과 주아에서도 마늘 모자이크 바이러스의 검정이 가능했다. 11. 우리나라 5개 지방에서 수집한 마늘 종구 150개와 주아 30개에 대해 혈청학적방법으로 마늘 모자이크 바이러스의 감염률을 조사한 결과 $100\%$의 감염률을 보였다. 12. 마늘 모자이크 바이러스와 크기가 근사한 Potato Virus X. Potato virus Y, Potato virus S, Potato virus M 등과의 혈청학적 유연관계를 조사한 바, 마늘 모자이크 바이러스는 이들과 구별되는 다른 바이러스라고 생각된다. 13. 마늘의 모자이크 감염주에서 단일계통으로 분리하여 본 실험에 사용한 바이러스는 마늘의 바이러스 무감염주를 얻을 수가 없기 때문에 직접 마늘잎에 접종해서 모자이크톤의 병원이라는 것을 확인할 수 없었지만, 검정식물상의 반응, 혈청학적반응, 전자현미경적 관찰등의 간접적인 조사 결과로 미루어 미인록의 마늘모자이크 바이러스라고 생각된다.
This study was designed to verify the efficacy of garlic extracts for protecting the infecton of influenza and Japanese B encephalitis virus. Influenza virus (AO/PR8 strain) and Japanese B encephalitis virus (JaGAr O1 strain) were used to attack mouse through nasal route and each vaccines were injected subcutaneously. 0.002 and 0.2 mL/day of garlic extracts were orally administered to mice. The blood and serum samples were taken from the mice to measure LD50, Defense Index (DI), virus-neutralizing antibody for comparing virus influence inhibiting activities. Defense indices of the male and female mice were not significantly different at every experiment. Vaccination effectively inhibited the influence of influenza virus and 0.002 mL/day garlic extract (0.55$\pm$0.05) resulted in significantly higher DI than the control (0$\pm$0.05) (p<0.05). Although 0.002 mL/day garlic extract (0.55$\pm$0.05) resulted in significantly lower DI than the vaccination (1.10$\pm$0.05), 0.2 mL/day garlic extract (2.05$\pm$0.05) resulted in 10 times higher DI than the vaccination (1.10$\pm$0.05). Garlic extract did not affect DI in Japanese B encephalitis virus influence of the vaccinated mouse, but significantly reduced DI of the non-vaccinated mouse (p<0.05). Garlic extracts did not affect the production of the neutralizing antibody against influenza by vaccination. However, neutralizing antibody production of Japanese B encephalitis was accelerated by vaccination. Consequently, the current study proved the efficacy of garlic on inhibition of influenza virus. Finally, it is very hard to show the higher preventing effect on flu through ingestion of garlic as a food than vaccination.
PARK KWANG-SOOK;BAE YOUNG-JOO;JUNG EUN-JEONG;KANG SOON-JA
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권5호
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pp.1110-1114
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2005
Six viruses of the genera Carlavirus (Garlic mosaic virus, GarMV, and Garlic latent virus, GarLV), Allexivirus (Garlic virus X, GarV-X, and Garlic mite-borne filamentous virus, GarMbFV) and Potyvirus (Leek yellow stripe virus, LYSV, and Onion yellow dwarf virus, OYDV) from Korean garlic plants with mosaic symptoms were simultaneously detected by multiplex RT-PCR and subsequently sequenced. An immunocapture RT-PCR for the detection of GarLV, LYSV, and OYDV was also performed. The coat protein phylogenetic analysis of the garlic viruses showed that the Korean isolates were most closely related to the isolates from China, Japan, Brazil, and Argentina. This study is the first report for the differentiation of six garlic viruses in Korea by simultaneous detection using multiplex RT-PCR.
Potyvirus group에 속하는 것으로 알려진 마늘 모자이크 바이러스 (GMV)가 식물에서 병을 유도하는 메카니즘을 이해하기 위하여, 마늘에 존재하는 GMV에 대한 cDNA clone인 clone 29-6을 분리하였다. Northern blot 분석에 의해 이 바이러스의 genome size는 약 9 kb이고, 또한 clone 29-6은 GLV genome과 유사성이 없었으며, 마늘잎으로부터 분리된 $poly(A)^{+}$ RNA와 강하게 hybridization되었다. 이러한 사실은 이 cDNA clone이 마늘에 감염하여 모자이크 병반을 유도하는 GMV에 대한 cDNA clone 중의 하나인 것으로 생각되었다. Clone 29-6을 probe으로 사용하여 마늘 바이러스의 cDNA 은행을 탐색하여 이와 중첩되는 clone을 선별하여 염기서열을 결정한 결과 이들의 염기서열이 중첩부위에서 서로 일치하지 않았는데 이는 마늘은 여러 형태의 GMV에 의해 감염되어 있음을 암시한다.
The genomes of different allexiviruses were isolated and cloned from virus-infected garlic plants (Allium sativum), which were collected from farm fields in the southern provinces in Korea. The partial nucleotide sequences of the genomes from different allexiviruses were clearly identified in the virus-infected garlic plants. The cloned partial genomes of viruses in garlic plants showed a greater than 90% homology to previously identified allexiviruses and classified into species of GarV-A, -B, -C, -D, -E, and -X, demonstrating that species of allexivirus found in the other countries in the world are also widely distributed in the garlic plants in Korea.
Garlic can be infected by a variety of viruses, but mixed infections with leek yellow stripe virus, onion yellow dwarf virus, and allexiviruses are the most damaging, so an easy, inexpensive on-site method to simultaneously detect at least these three viruses with a certain degree of accuracy is needed to produce virus-free plants. The most common laboratory method for diagnosis is multiplex reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). However, allexiviruses are highly diverse even within the same species, making it difficult to design universal PCR primers for all garlic-growing regions in the world. To solve this problem, we developed an inexpensive on-site detection system for the three garlic viruses that uses a commercial mobile PCR device and a compact electrophoresis system with a blue light. In this system, virus-specific bands generated by electrophoresis can be identified by eye in real time because the PCR products are labeled with a fluorescent dye, FITC. Because the electrophoresis step might eventually be replaced with a lateral flow assay (LFA), we also demonstrated that a uniplex LFA can be used for virus detection; however, multiplexing and a significant cost reduction are needed before it can be used for on-site detection.
To understand the molecular structure and pathogenesis mechanism of Korean garlic viruses (GV), virus particles were isolated from field-grown garlic leaves and RNA genome was isolated from them. It was used for constructing cDNA library for GV. Several cDNA clones for GV were isolated and classified into 4 different groups on the basis of cross Southern hybridization. Northern blot analysis of GV RNA with one of these cDNA clones shows that the clone is a cDNA for GV RNA.
We, Tong Yang Moolsan Co. Ltd. (TYM) set up the mass-production system for virus-free seed garlic via tissue culture technique. TYM's tissue culture technique is called as 'Multiple shoot propagation technique'. This technique can lead mass propagation of genetically homogeneous seed garlic in a short period because of its highly proliferation rate of in vitro shoots ($15^{10}$ /year). TYM researchers applied the technique to some selected garlic cultivars with superior characteristics and carried out field test of productivity in the inside and outside of the country for several years. According to the yearly results of field test with virus-free seed garlic, we ascertained that virus-free seed garlic can produce the highly yield increase (max. above $50\%$) and also can enhance the product quality. Consequently, we estimated that TYM's seed garlic will contribute to farmers with increase of income and can elevate the national position of garlic market in the world for its competitive power of technical and production cost.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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