• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제13권3호
• /
• pp.469-472
• /
• 2003

A method that effectively precipitates capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b (polyribosylribitol phosphate, PRP) conjugated to tetanus toxoid (TT), PRP TT in a liquid vaccine has been developed to measure free PRP present in TT-conjugate vaccine. The method involves adding anti-TT antibody and ammonium sulfate to precipitate PRP-TT conjugate and measuring free PRP in tile supernatant. This new method provides a complete precipitation of the total PRP-TT, and provides an accurate and reproducible measurements of free PRP. The accuracy of the assay was confirmed by spiking known amounts of unconjugated PRP to PRP-TT conjugate, and the new method was found to have no effect on free PRP while precipitating PRP-TT. The published acid precipitation method did not produce reproducible results due to incomplete precipitation of PRP-TT, especially when the vaccine is formulated in a salt-buffered solution.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
• /
• 제9권6호
• /
• pp.490-494
• /
• 2004

An efficacy test of PRP (polyribosylribitol phosphate)-TT (Tetanus toxoid) conjugate vaccines was carried out using BALB/c mice as an animal model by inoculating Haemophilus in­fluenzae type b (Hib) with a virulence enhancement factor (VEF). Three administrations of the conjugate vaccines at 2-week intervals elicited a significantly high level of PRP antibodies (P>0.0001). The protective activity of the PRP immunization was challenged with either Hib with iron dextran (Hib/) or with a combination of mucin and hemoglobin (Hibmh) as a VEF. The me­dium lethal dose $(LD_{50})$ for Hibmh and Hibiwas measured as 10 CFU (Colony Forming Unit) and $2.5{\times}10^{8}$ CFU respectively. Each immunized animal was challenged with five or ten times the $LD_{50}$ level of bacteria with a VEF. A significant difference in mortality between the immunized and control mice (P> 0.01) was observed with the Hibmh challenge inoculation but not with the Hibi challenge inoculation. These results show that a combination of mucin and hemoglobin was able to enhance the virulence of Hib in BALB/c mice to cause a lethal infection, thus suggesting that BALB/c mice introduced to this method can be an effective model animal for testing the protective efficacy of H. influenzae conjugate vaccines.

• Pediatric Infection and Vaccine
• /
• 제24권3호
• /
• pp.125-133
• /
• 2017

목적: 1995년 한국에서 b형 헤모필루스 인플루엔자(Haemophilus influenzae type b [Hib]) 백신이 도입된 이후, 2013년 국가예방접종에 포함되었다. Hib 백신 도입 시기 이후 다른 나라의 일부 연구에 따르면, 침습적 Hib 질환은 소아보다 성인, 특히 노인 및 면역 저하 환자에서 더 자주 발생한다고 보고하였다. 따라서, 본 연구는 20-85세의 한국 성인에서 항-polyribosylribitol phosphate (PRP) 항체의 양적 및 질적 측정을 통하여 질병 감수성을 평가하고자 하였다. 방법: 혈청은 39명의 건강한 성인(20-50세)과 면역 저하 상태가 아닌 30명의 노인(75-85세)에서 수집하였다. 모든 피험자는 7일 이내에 항생제를 복용하지 않았다. 항-PRP 면역글로불린 G (immunoglobulin G [IgG]) 항체가 및 혈청 살상능 역가(serum bactericidal index [SBI])는 효소결합면역흡착측정법과 혈청 살상능 평가분석을 통해 측정하였다. 결과: 항-PRP IgG 항체가의 기하평균 및 SBI의 기하평균은 성인군에서 각각 $0.88{\mu}g/mL$ (95% 신뢰 구간, 0.17-3.85) 및 354 (95% 신뢰구간, 50-2,499)이었고, 노인군에서는 각각 $1.67{\mu}g/mL$ (95% 신뢰구간, 0.53-5.24) 및 449 (95% 신뢰구간, 146-1,376)이었다. 소아에서 Hib 감염에 대한 방어 농도로 인정하고 있는 0.15 및 $1.0{\mu}g/mL$을 적용하였을 때, 항체 양성률은 성인군에서 87.2%, 노인군에서 100%였다. SBI의 양성률($SBI{\geq}4$)은 성인군에서 82.1%, 노인군에서 100%였다. 결론: 대부분의 성인군과 노인군에서 양적으로나 기능적으로 Hib 질환에 대한 방어 면역력을 가지고 있었으나 모두는 아니었다. 높은 면역력과 낮은 Hib 순환율은 인구에서 Hib에 대한 자연면역을 감소시킬 수 있으므로, Hib 면역과 질병에 대한 지속적인 감시가 필요하다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
• /
• 제50권2호
• /
• pp.143-150
• /
• 2007

목 적: 인체의 항 PRP IgG 항체를 정량적으로 측정하기 위한 방법인 표준화된 효소면역법의 타당성을 연구하는 것이 목적이다. 방 법: 인체의 항 PRP IgG 항체를 정량적으로 측정하기 위한 방법인 표준화된 효소면역법의 타당성을 연구하기 위해 특이성, 반복성, 실험실내 정밀성, 정확성, 최소 정량 한계, 및 안정성을 평가하였다. 결 과: 본 연구에서 사용한 효소면역법은 검사에 사용된 항원(HbO-HA)에 특이성을 보였으며 반복성, 실험실내 정밀성 등의 정밀성은 허용기준(반복성 : $CV{\leq}15%$, 실험실내 정밀성 : $CV{\leq}20%$)을 만족하였다. 정확성은 28개 혈청을 대상으로 한 RABA 정량결과와 효소 면역법 정량결과 비교시험에서 높은 상관계수를 보였고 첨가 회복 검사 결과 허용기준($100{\pm}20%$)을 만족하였다. 최소 정량 한계 시료 정량결과의 정밀성과 정확성은 공칭 양의 -14.7~-4.7%로 모두 허용기준(정밀성 : $CV{\leq}25%$, 정확성 : ${\pm}25%$)을 만족하였다. 안정성 중 냉 해동 안정성과 단기 온도 안정성도 모두 허용기준(${\pm}20%$ 이내)을 만족하였다. 결 론: 이상의 결과로 이화여자대학교 의과학연구소 백신효능연구센터에서 시행한 본 효소 면역법은 혈액 내에 존재하는 항 PRP IgG 항체를 정량적으로 측정하는 시험법으로 적절하였다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
• /
• 제50권5호
• /
• pp.449-456
• /
• 2007

목 적 : 우리나라에서 Hib 백신을 기본 예방접종에 포함시키는 것을 고려할 때 우리나라의 Hib 질환의 역학, 우리나라 소아의 Hib 백신에 대한 면역 반응에 대한 연구가 있어야 한다. 본 연구는 우리나라 소아에서 면역원성에 근거한 추가접종의 필요성 여부를 확인하고자 하였다. 방 법 : 2006년 6월부터 2006년 12월까지 이화여자대학교 동대문 병원, 강남 차병원, 관동대 명지병원에 내원하여 검사를 위해 혈액 채취의 기회가 있었던 12-23개월 사이의 소아 144명을 대상으로 하였다. 분리된 혈청으로 항 PRP 항체가를 효소면역법으로 측정하였고, 혈청 살균 능력 측정을 시행하였다. 결 과 : 추가접종까지 완료한 군의 항 PRP 항체의 기하평균은 기초접종을 완료한 군이나 접종하지 않은 군의 기하평균보다 높았다(P<0.05). 항 PRP 항체가가 $1.0{\mu}g/mL$ 이상인 비율은 추가접종까지 완료한 군은 96.5%로 다른 세 군에 비해, 기초접종을 완료한 군은 68.6%로 접종하지 않은 군의 30.0%에 비해 양성률이 높았다(P<0.05). 평균 살균 역가는 추가접종까지 완료한 군이 11,205로 기초접종을 완료한 군의 3,946보다 높았다(P<0.05). 항 PRP 항체가와 살균 역가는 양의 상관관계에 있었다(R=0.60). 결 론 : 우리나라 소아는 Hib 백신의 기초 접종 후 12-23개월의 나이에 많은 경우에서 방어 농도 이상의 항체가를 여전히 가지고 있었다. 추가접종에 대한 면역 기억 반응도 좋아 추가 접종 받은 소아의 항체가는 받지 않은 소아에 비해 의미 있게 높았다. 우리나라에 Hib 백신의 도입과 접종 횟수를 결정하기 위해서 지속적인 연구가 필요하다.