김치 담글 때 조미료로 sucrose를 첨가한 경우, 발효 시간의 경과와 더불어 김치국물의 정도가 증가한다. 이 현상은 장김치에서 두드러지는 것으로 관찰되었으므로 본 연구에서는 소금으로 담근 김치를 대조구로 하여 간장으로 담근 장김치에서의 정도 증가를 비교하였으며 이 점성물질의 본성을 밝힘과 동시에 그 생성조건을 검토하였다. 장김치국물에 에탄올을 가하여 생성된 침전물을 산으로 가수분해하여 HPLC로 분석한 결과 glucose를 단위체로 한 polysaccharide인 dextran으로 밝혀졌다. 이 dextran의 생성에는 glucose 보다는 sucrose가 효과적이며, sucrose의 농도가 10%까지 증가함에 따라 점도는 비례하여 증가하였다. 또 소금보다는 간장으로 담근 김치에서 정도가 높았으며, 협기적인 조건보다는 호기적인 조건에서 점도가 높았다. 장김치는 소금김치 보다 산생성이 많았으며 당을 첨가한 경우 산 생성량은 증가하였다. 또 환원당량은 sucrose를 첨가한 경우 김치숙성 초기에 크게 증가하였다. 김치발효과정 중 총 균수와 Leuconostoc 세균수의 변화를 살펴 본 결과 발효 1일째에 Leuconostoc 균수, 총 균수가 최대에 달했으며 Leuconostoc 균수는 그 후 점차 감소하였다. 장김치와 소금김치 간에는 발효 중 균수의 차이가 없었으며 sucrose를 첨가한 경우에도 큰 차이는 없는 것으로 나타나 김치에서 점성물질이 생성되는 것은 균수에 의한 차이가 아니라 점성물질 생성 조건의 차이에 의한 것으로 생각되었다.
토양으로부터 점질성을 나타내 주는 물질 생산세균을 분리하였으며 이 균을 동정한 결과 Enterobacter agglomerans로 동정되었다. 이 균이 생산하는 다당류는 glucose와 galactose로 구성된 ${\beta}-glucan\;polymer$로 추정되었다. 이 다당류는 1% 농도에서 264 mPa.s.의 점도를 나타내며 항복치는 4.89Pa이었다. 한편 이 다당류 용액은 열안정성은 없으며 pH 및 NaCl에 대한 안정성은 있었다.
산업용 다당류의 개발을 목적으로 고점도의 다당류생산 미생물을 토양으로부터 분리하였다. 본 세균은 동정한 결과 Pseudomonas mendocina로 생각되었다. 본 세균이 생산하는 다당류는 o-acetyl기를 함유한 ${\beta}-glucan$으로 추정되며 구성당으로서는 포도당과 람노오스가 몰비로 2.2 : 1.0 구성으로 되어 있고 수용액은 의가소성 유체이다. 1% 용액은 428mPa.s의 점도를 나타내며 항복치는 8.89Pa이다. 이 용액은 열안정성은 없으며 pH 안정성과 염안정성은 있었다. 유동활성화에너지는 6.57 Kcal 이다.
Pseudomonas delafieldii이 배양액으로부터 분리한 다당류 용액의 물성을 검토하였다. 본 다당류는 매우 점도가 높은 의가소성 물질로 1% 용액의 겉보기 점도는 42sec$^{-1}$에서 1769mpaㆍs이었다. 이 용액은 pH에 대한 안정성은 있으나 열 안정성은 보이지 않았다. 이 용액의 유동 활성에너지는 4.44kacl/mole 이고, 농도의존성은 double 1logarithm으로 포현되었다.
물성조정제로서 고전도의 다당류를 생산하는 토양세균을 분리 선발하여 동정한 결과 Pseudomonas delafieldii로 판단되었다. 이 세균의 증식을 위한 pH와 온도는 6.5 및 3$0^{\circ}C$이었다. 최대 비성장속도는 0.25 h$^{-1}$이며 염류배지에서 다당류의 비생산속도, 증식수율 및 다당류 생산수율은 6.25mg/g-cell/h, 54.5%, 38.39%이었다. 본 다당류는 포도당과 gluconolactone을 몰비로 1.9:1.0로 함유한 $\beta$-glucan 으로 추정되었으며 원인 분석결과 탄소 31.85% 수소 31.85% 수소 5.l5%를 함유하고 아세틸기를 1.35%가지고 있었으며 고유점도는 42.84dl/g, 분자량은 5.64$\times$$10^7$이었다.
Gellan형 미생물 다당류를 생산하는데 관련된 기초 자료를 얻기 위하여 배지조성, 배양온도 및 초기 pH등에 대한 플라스크 실험을 수행하였으며 이를 근거로 회분식, 유가식 및 연속배양을 실시하였다. 또한 배양액의 비뉴우튼성 유체 특성을 조사하였고 이때의 교반동력을 측정하였다. 플라스크 배양을 통하여 얻은 결과를 이용하여 회분식 배양의 최적조건을 확립하였으며 각종 metabolic parameter들을 추정하였다. 유가식과 연속식 배양을 통하여 생산성 향상을 시도한 결과 유가식과 연속식 배양에서 생산성 향상을 꾀할 수 있었다. 고점성 배양액에서의 물질전달 장해현상을 극복하기 위한 일련의 연구가 필요하다고 사료되며 이로부터 생산성 향상을 크게 기대할 수 있을 것으로 보인다.
A bacterial strain producing highly viscous polysaccharide(A29 POL) was isolated from soil and identified sa Bacillus sp. A29. The cultural conditions of the Bacillus sp. A29 for the polysaccharide prouction were dextrin 12%, soytone 0.2%, SnCl$_{2}$ $\cdot $2H$_{2}$O 0.02%, Na$_{2}$HPO$_{4}$ $\CDOT $12H$_{2}$O 0.36%, L-alanine 0.01%, initial pH6.8, and 30$\circ $C at pH 3 FOR 4 days. Final viscosity of the culture broth was 65, 000 cp and then the amount of produced polysaccharide was 8.3 g/l. A29 POL was composed of glucose and xylose. A29 POL showed high viscosity at low concentration(0.1%) and in the presence of the salts such as NaCl or CaCl$_{2}$. A29 POL showed high viscosity acid condition and at alkali condition and high pseudoplasticity in the presence of a NaCl or CaCl$_{2}$. It was shown that the viscosity at high temperature(80$\circ $C) was decreased but it was recovered at low temperature (20$\circ $C. A29 POL was able to from film and gel in the presence of MgSO$_{4}$ $\CDOT $7H$_{2}$O, Na$_{2}$CO$_{3}$ \CDOT $H$_{2}$O, MnSO$_{4}$ $\CDOT $ 7H$_{2}$O. A29 POL had anionic charge.
토양에서 분리한 세포외 다당류 생산균주 PS-12는 형태학적, 생리학적, 화학적 분석에 의하여 Bacillus sp.에 속하는 균주로 동정되었으며, 분리균주 PS-12는 Bacillus sp. PS-12로 명명하였다. Bacillus sp. PS-127가 생산하는 세포외 다당류는 에탄올 침전, cetylpyridinium chloride (CPC) 침전과 gel permeation chromatography를 이용하여 정제하였으며, 정제된 다당류 PS-12의 당조성은 glucose, mannose, galactose와 fucose가 7:3.2:2:1의 몰비로 구성되어있었다. Bacillus sp. PS-12로부터 분리된 다당류 PS-12를 이용하여 면역증강효과를 확인하였다. TNF-${\alpha}$ 및 lL-6 측정은 RAW264.7 대식세포주를 사용하였으며 cytokine 정량을 위하여 ELISA kit를 이용하였다. RAW264.7 세포주에 대한 PS-12의 세포독성을 확인하기 위하여 세포독성이 10% 미만을 나타내는 농도인 2 ${\mu}g$/ml을 PS-12의 최대농도로 측정하였다. PS-12는 ${\mu}g$/ml에서 TNF-${\alpha}$를 정상세포보다 50배 이상 높은 수치로 생산하였다. 또한 lL-6의 생산을 농도 의존적으로 증가시켰다. 이러한 결과로부터 PS-127가 면역세포에 대해 세포독성을 거의 나타내지 않는 농도에서 대식세포로부터 TNF-${\alpha}$와 11-6의 cytokine 생산을 함으로써 면역증강효과를 나타낸다는 것을 확인하였다.
미생물유래 다당류 생산균주를 분리하기 위해 전국 각지의 토양시료로부터 가장 높은 점성과 다당류 생산성을 나타내는 균주 GP32를 분리하였으며, 분리균주 GP32의 동정을 분리균주의 형태학적, 생리학적 특성을 조사한 결과, Pseudomonas 속 세균으로 확인되었으며 최종적으로 Pseudomonas sp. GP32로 명명하였다. 플라스크 수준에서 Pseudomonas sp. GP32의 다당류 생산을 위한 가장 적합한 탄소원과 질소원은galactose와 (NH4)2SO4를 이용하였을 때 가장 많은 다당류를 생산하는 것으로 확인되었으며, 다당류 생산을 위한 최적의 C/N ratio는 50이었다. 다당류 생산을 위한 최적 pH와 온도는 각각 7.5와 32℃였다. 최적화된 배지를 이용한 fermentor 배양에서 다당류 생산은 배양 70시간에 최고치를 나타내었으며, 이때 다당류 생산량은 15.7 g/l이었다. Pseudomonas sp. GP32로부터 생산된 다당류는 ethanol 침전, cetylpyridimium 침전과 gel permeation chromatography를 통하여 정제하였으며, 정제된 다당류는 Biopol32로 명명하였다. Biopol 32의 분자량은 3×107 datons이었으며, Biopol32가 함유하고 있는 구성당은 galactose : glucose : gulcouronic acid : galactouronic acid 등이 1.85 : 3.24 : 1.00 : 1.42의 몰비로 함유되어있다. Biopol32 용액은 의가소성 성질을 갖는 고분자 화합물로서 Zoogloea ramigera가 생산하는 생물고분자인 zooglan보다 모든 농도에서 높은 점성을 나타내었다. Biopol32의 실제 폐수처리현장에서 응집제로의 사용 가능성을 검토하기 위하여 식품폐수, 섬유폐수와 제지폐수를 대상으로 응집효율을 조사한 결과, 높은 COD 감소율 (58.4~67.3%)과 SS제거율(82.6~91.3%)를 나타내어 실제 산업폐수에서 뛰어난 응집효율을 나타내었다.
The strain A49, which produces a new type of extracellular polysaccharide was isolated from soil samples. From morphological, physiological and biochemical tests, the strain A49 was identified as a Bacillus polymyxa and named Bacillus polymyxa A49. Bacillus polymyxa A49 was found to produce a highly viscous extracellular polysaccharide when grown aerobically in a medium containing glucose as the sole source of carbon. The polysaccharide (A49 POL) showed a homogeneous pattern on gel permeation chromatography (GPC) and its molecular weight was estimated to be about 1.6 mega dalton (mDa). The FT-IR spectrum of A49-POL revealed typical characteristics of polysaccharides. As a result of investigations with HPLC and carbozole assay, A49-POL was found to consist of L-fucose, D-galactose, D-glucose, D-mannose, and D-glucuronic acid, with the molar ratio of these sugars being approximately 1:2:7:50:12. Rheological analysis of A49 POL revealed that it is pseudoplastic and has a higher apparent viscosity at dilute concentrations than does xanthan gum. The consistancy factor of A49 POL was found to be higher, and the flow index of A49 POL lower, than xanthan gum. Its apparent viscosity was comparatively unstable at various temperatures. the A49 POL showed the highest apparent viscosity at pH 3. When salts were added to A49 POL solution, the solution was compatible with up to 10% KCl, 35% NaCl, 55% $CaCl_2$, 55% $MgCl_2$, 55% $K_2HPO_4$, and 110% $Ca({NO_3})_2$, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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