Comparison of Agar-gel Diffusion Test, Counterimmunoelectrophoresis and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay in the sera of skin teat positives for paragonimiasis

간흡충 피내반응 양성자에 대한 Agar-gel Diffusion, Counterimmunoelectrophoresis 및 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay의 비교

Agar-gel Diffusion test (AGD), Counterimmunoelectrophoresis(CIEP) and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA) were examined with the sera of skin test positives for paragonimiasis. The crude antigen (Paragcnimus whole worm extracts: protein concentration, 7.56mg/m1) and human sera were used in AGD and CIEP. And in ELISA test, diluted antigen with 1:40, 000 of crude antigen and diluted sera with 1:100, 1:200 were used in the test. The positive identical ratio between AGD and CIEP reactions is 985 and negative identical ratio is 100%. One or three precipitin bands are observed in AGD. One to seven precipitin bands are also revealed in CIEP. Especially, deeply stained bands are observed in CIEP than those of AGD. The positive identical ratios between AGD and ELISA tests are 96% in 1:100 diluted sera, and 94% in 1:200 diluted sera. But the negative identical ratios between AGD and ELISA tests are 97% and 99% respectively in 1:100 and 1:200 diluted sera. The positive identical ratios between CIEP and ELIEA tests are 98% and 96% respectively in 1:100 and 1:200 diluted sera, but also 97% and 99% in 1:100 and 1:200. Control sera, such as clonorchiasis, amoebiasis and toxoplasmcsis, revealed all negatives with Paragonimus antigen in AGD, CIEP and ELISA tests. By above results, ELISA was mcst sensitive, next CIEP and AGD, But AGD test apprars to be more useful when used to crude antigen without cross rfacticn with other parasitic infections. CIEP test is basically equal in terms of precipitin reaction, but CIEP is able to be detected more sensitively and rapidly though less simple in handiwork than AGD. Consequently, three methods for inlmunological tests of paragonimiasis have gccd correlations with one another. Also, each of these has both merits and demerits in iymunolcgical test for paragonimiasis. But the ELISA test was proved to be the most sensitive and convenient tool for mass screening test, especially in cacti of using purified antigen.

임상적으로 폐흡충증이 의심되나 충란검출이 안되었던 155예(3예는 충란발견)의 피내반응 양성례에 대하여 Agar-gel Diffusion (AGD)반응, Counterimmunoelectro-phoresis(CIEP)반응 및 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)를 실시하여 이들사이의 상관관계를 검토하였다. AGD 반응과 CIEP 반응은 폐흡충친항원원액(단백농도 7.56mg1m1)과 혈청원연을 사용하였고 ELISA반응에서는 상기 조항원의 40,000배 희석항원을, 그리고 혈청은 100배 및 200배 희석혈청을 사용하였다. 1. AGD 반응과 CIEP 사이의 양성반응의 일치률은 98%이었고 융성반응의 일치률은 100%이었다. 침강대는 AGD 반응에서 1∼3개가 흔히 관찰되었고 CIEP 반응에서는 1∼7개가 관찰되었으며 염색강도도 후자에서 일부의 피검혈청에서 강하게 나타났다. 2. AGD 반응과 ELISA 반응은 사성반응에서는 100배 희석혈청에서 96%, 그리고 200배 희석혈청에서 94%의 일치률을 나타내었고, 음성반응에서는 100석 희석혈청 및 200배 회석혈청에서 각각 97%와 99%의 일치율을 나타내었다. 3. CIEP와 ELISA 반응은 양성반응에서 100배 희석혈청에서는 98%, 200배 희석혈청에서는 96%의 일치률을 나타내었고 융성반응에서는 100배 희석혈청에서 97%, 200배 희석혈청에서 99%의 일치률을 나타내었다. 4. 대조혈청인 간흡충감염 혈청, 아메바감염 혈청 및 Toxoplaima형광항체반응 양성혈청에 대한 AGD 반응, CIEP 및 ELISA 반응은 전례에서 음성이었다. 이상의 결과로 볼 때 반응에 사용된 항원-항혈청의 농도로 보아서는 ELISA 반응의 감수성이 월등히 높았다. 같은 농도의 항원과 혈청을 사용한 AGD와 CIEP 반응에서는 CIEP에서 침강반응의 염색강도가 보다 강하게 나타난 것으로 보아 세가지 반응의 감수성의 높은 순위는 ELISA, CIEP, AGD라고 보여진다. 그러나 본 실험에서 AGD와 CIEP반응에서 ELISA보다 높은 농도의 항원과 항혈청을 사용하였을 때 감수성의 차이는 거의 볼 수 없는 유사한 상관관계의 반응을 나타내었다. 즉 반응방법에 따라 적절한 농도의 항원과 항혈청을 사용한다면 감수성의 차이는 없다고 본다. 세가지 반응의 유효성 으로 볼 때 가장 수기가 간편한 AGD 반응은 조항원을 사용할 때 용이하게 사용할 수 있는 방법이라 생각되며 CIEP는 AGD보다 전기영동장치가 필요한 번거로움이 있으나 보다 조기에 반응 결과를 알 수 있다. 가장 감수성이 예민한 ELISA반응은 항원을 정제하여 소동의 항원으로 다수의 집권집사를 할 수 있는 가장 바람직한 방법이라 생각된다. (본 실험을 수행함에 있어 ELISA 반응을 검사해 주신 연세의대 기생충학교실의 장재경 선생님께 감사드립니다)