Proteinase activity in the isolates of Trichomonas vaginalis according to their pathogenicity

질트리코모나스의 병원성과 단백 분해 효소와의 상관성

Ten axonic isolates of Trichomonns uaginolis were subcutaneously injected to the BALB/c mice in order to assess their pathogenicity by means of so-called "mouse assay" method. All the isolates revealed neutral and acid proteinase activities both in their Iysates and in culture media, but the specific activities of both proteinases in the severely pathogenic group were significantly higher than the mildly pathogenic group (p < 0.05). In the SDS-PAGE system in which the electrophoretic gels contained 0.4% gelatin as the substrate, five different handing patterns of trichomonal proteinases were detected, and the patterns were closely related with the pathogenicity of the isolates of T. vosinalis. All five bands might be regarded as cysteine proteinases group in the inhibitor assays. The cytotoxicity of the Iysates of T. vaginalis to the target Chinese hamster ovarian (CHO) cell line was also significantly different according to the pathogenicity of the isolates, and generally lower in the Iysates treated with cysteine proteinase inhibitors than in the control Iysates. In summarizing the results, it might be considered that the proteinases of T.vaginalis showing five electrophoretic banding patterns are closely related with the pathogenicity and cytotoxicity of the isolates of T. voginolis.

이 연구는 환자로부터 분리하여 무균 배양된 10개의 질트리코모나스 분리주에 대하여 병원성 여부를 판정하고 단백분해효소 관련 여부를 알아보고자 시도된 것이다. 질트리코모나스 분리주들은 마우스 피내 접종 실험을 통한 병원성 판정에서 약병원성 주, 중등도 병원성 주 및 강 병원성 주 등 3개 그룹으로 나눌 수 있었으며 중성 단백분해효소 및 산성 단백분해효소 활성도는 질트리코모나스 추출물 및 그 배양액에서 약 병원성 주에 비해 강 병원성 주의 활성도가 높게 나타나 피하농양 크기에 따른 병원성과 상기 단백분해효소의 비활성도(specific activi쇼) 사이에 상관관계가 있었음을 알 수 있었다(p < 0.05) 질트리코모나스 단백분해효소는 gelatin을 기질로 하는 SDS-PAGE 전기영동에서 RF치를 달리하는 5가지 분획대가 나타났으며 그 분획양상은 각 분리주 의 병원성에 따라 일정한 양상을 나타내었다. 그리고 여러가지 단백분해효소 억제제를 전기 영동 효소액에 처리했을 경우 antlpaln과 leupeptin 처리군에서는 분획이 전혀 나타나지 않았으며 EUTA 처리군에서는 대조군에 비해 그 활성이 약화된 분획이 관찰되었고, PMSF 처리군에서의 분획들은 대조군과 그 활성의 차이를 볼 수 없어 이들 단백 분해효소는 cystelne 단백분해효소로 추정되었다. 조직 세포에 대한 질트리코모나스 추출물의 세포독성은 병원성에 따라 차이가 있었고 추출물의 단백질 농도 $12.0{\;}\mu\textrm{g}/100{\mu}\ell$ 이상에서 세포 독성에 따른 병원성 구분이 용이하였다. 그리고 질트리코모나스 추출물에 단백분해효소 억제제를 처리한 결과 대조군에 비하여 세포 독성이 낮게 나타났으며, 특히 antipain 처리군에서는 조직 세포에 대한 세포 독성이 현저하게 낮았다. 이상의 결과로 보아 cysteine계로 추정되는 질트리코모나스의 단백분해효소는 특이한 전기영동 활성 분획상을 나타내었는 바 이들은 모두 충체의 병원성 및 세포 독성과 밀접한 관련이 있었다.