An Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for $Aflatoxin\;M_1$ in Cow's Milk without a Cleanup Procedure

희석에 의한 우유 중 $Aflatoxin\;M_1$의 효소면역측정법

A simple and rapid detection system for $aflatoxin\;M_1\;(AFM_1)$ in cow's milk by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed. Specific antibodies against $AFM_1$, conjugated to bovine serum albumin $(AFM_1-BSA)$ were raised in rabbits and purified. The cross-reactivities of the antibodies against aflatoxin analogs were less than 29.9%. When a competitive direct ELISA (cdELISA) for $AFM_1$, established by use of the antibodies was applied to the spike test of $AFM_1$ onto uncontaminated cow's milk, the assay recovery was unstable unless cow's milk was diluted to 40% (2:3) with phosphate buffered saline (PBS). In that condition of sample dilution, the mean ELISA recovery of $AFM_1$, from the cow's milk was 113% (coefficient of variation (CV) of each recovery percentage, 8.2%) in the range of $0.3{\sim}3.0\;ppb$. These results showed that the ELISA system could be a convenient tool to monitor the contamination of AFM1 more than 0.5 ppb in cow's milk (FDA allowance limit) easily.

우유 중에 존재할 수 있는 발암성 진균독소의 하나인 $aflatoxin{\;}M_1{\;}(AFM_1)$을 신속, 간편하게 분석할 수 있는 효소면역측정법(ELISA)을 개발하고자 하였다. 소혈청알부민에 공유결합한 $AFM_1\;(AFM_1-BSA)$을 토끼에 면역하여 항체를 생산하고 정제하였다. 이 항체의 유사독소와의 교차반응율은 29.9%이하의 비교적 낮은 교차율을 나타냈다. $AFM_1$의 검출을 위하여 확립한 직접경합ELISA (cdELISA)로 우유에 인위적으로 오염시킨 $AFM_1$을 정제과정없이 ELISA로 분석하는 경우, 우유를 PBS로 40%되게(2:3) 희석하였을 때 양호한 회수율을 보였다. 이 조건하에서 행한 ELISA의 $AFM_1$분석 회수율은 0.3-3.0 ng/ml의 오염농도 범위에서 농도별 회수율로 평균 113%, 그 분산은 8.2%였다. 본 연구에서 개발한 ELISA system은 우유 중의 0.5 ppb이상의 $AFM_1$을 정제과정없이 손쉽게 분석하는데 유용할 것으로 판단된다.