국내 도축장 및 도축장 출하 닭을 대상으로 NDV 오염 실태를 조사하였다. 조사결과, 닭출하농장, 닭수송용차량, 도축장 현수실, 도축장 냉각수에서 각각 조사 대상건수의 13.0%, 13.3%, 16.0%, 10.8%에서 NDV가 분리되었다. 시기별로 보면 차량, 현수실, 냉각수 모두에서 7월에 가장 많이 바이러스가 분리되었다. Pathotyping RT-PCR을 실시한 결과, 이들 분리된 NDV 분리주는 모두 저병원성 NDV 양성 반응을 나타내었으며, F 단백질 분절 부위에 모두 $^{112}GKQGR/L^{117}$ motif를 가지고 있었다. 본 연구에서 분리된 NDV 분리주의 F 단백질 유전자를 분석하여 보았을 때, 조사한 NDV 분리주 25주 중 24주가 NDV V4주와 같은 유전적 cluster를 형성하였으며, 나머지 1주는 NDV Ulster 2C주와 같은 유전적 cluster를 형성하였다. 이와 같은 연구 결과로 보아 국내에서는 출하 닭, 수송 차량, 현수실, 냉각수 등 생산에서 도축 단계까지 일련의 과정에서 높은 빈도로 저병원성 NDV 오염이 이루어지고 있음을 알 수 있었다.
Vero 세포를 이용한 뉴캐슬병 바이러스 생산에서 pH, 온도, 혈청농도, M.O.I. 등의 최적조건을 구하고 polycation, 항산화제, 그리고 DMSO 등의 첨가제가 바이러스 생산에 미치는 영향에 대한 연구를 수행하였다. 뉴캐슬병 바이러스의 최적 배양조건은 초기 p pH 7.2, 혈청농도 2 % FBS, 바이러스 접종량 0.1 M.O.I. 및 바이러스 증식온도 $34^{\circ}C$로 확인하였다. Polycation 인 DEAE-dextran, poly-L-Iysine과 항 산화제인 ascorbic acid는 각 $15\mu\textrm{g}/ml, 3\mu\textrm{g}/ml$그리고 0.1mM의 최적농도로 첨가했을 때 대조군에 비해 상당히 증대된 최대 바이러스 수율을 얻을 수 있었다.
The objective of these experiments was to develop an attenuated thermostable Newcastle disease virus(NDV), CBP-1 strain isolated from infected pheasants. Safety, pathogenicity and protective effects against velogenic NDV were also investigated to evaluate if the attenuated NDV, CBP-1 strain could be a candidate for a new NDV vaccine strain. CBP-1 strain was passaged up to the 173 times by nine days old embryonated eggs and chicken embryo fibroblast(CEF) cell cultures. Its sensitivitly to lipid solvents and low pH, thermostability, mean death time(MDT), intracerebral pathogenicity index(ICPI) of one day old chicks and intravenous pathogenicity index(IVPI) of four weeks old chicks were examined. Safety, boosting and protective effects were tested by chicks mortality. CBP-1 NDV strain had significant thermostability at 56$\^{C}$ for 30 minutes. by hemagglutinin activity and egg infectivity test, but was not resistant to lipid solvent. It showed possibility to use as a feed or water vaccine because of the resistance to low pH. MDT, ICPI and IVPI of CBP-1 were attenuated from 51.5, 1.96, 2.60 to 112.4, 1.12, 1.45. These results implied that the 173rd passages in embryonated egg and CEF cell cultures induced a substantial attenuation of the pathogenicity of the parent virus, changing the virulence from velogenic to intermediate between mesogenic and lentogenic. After vaccination with CBP-1 at one day old by drinking water mortality was 17.5%. However, spray vaccination with B1 at one day old, CBP-1 at two weeks ild and challenge with velogenic Kyojeongwon strain at four weeks old showed 93.5% survival rate. Mortality of chicks, vaccination with 173rd passaged CBP-1 strain at one day old, two weeks old and challenge with Kyokeongwon strain at four weeks old, was 20.0%. The results of these studies indicated that partial attenuated CBP-1 strain tended to be a low safety for ND of broiler chicks and would need to be more successive attenuation.
본 연구를 통하여 Vero 세포에서 강독형 NDV인 Kr005주를 55대 연속 계대하여 Vero 세포에 적응된 Kr005/V 주를 작성하였다. Kr005/V 주는 Vero 세포에서 $10^{7.8}/mL$의 높은 바이러스 증식성을 보였으며, 감염세포는 cell rounding과 같은 CPE를 형성하였다. 또한 이열성(heat labile) NDV Kr005주와 달리 NDV Kr005/V 주는 내열성(thermostable)을 보였다. 계태아에서 평균 치사 시간(MDT)를 측정한 결과, 강독형인 Kr005주(49.6시간의 MDT)와 달리 Kr005/V 주는 120시간이상의 MDT를 보여 약독형 바이러스(lentogenic virus)로 분류되었다. Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 염기서열을 분석한 결과, HN 단백질의 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었다. Kr005/V 주와 Vero 세포를 사용하여 야외 닭 혈청을 대상으로 혈청중화 항체가를 측정한 결과, Kr005주와 CEF 세포를 사용하여 측정한 혈청중화 항체가와 97%의 상관성을 나타내었다.
Firas Taha Mansour Al-Mubarak;Harith Abdulla Najem;Hazim Talib Thwiny
대한수의학회지
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제63권4호
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pp.41.1-41.6
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2023
Many viruses can infect different types of birds, with poultry being the most susceptible. These viral diseases have a direct negative impact on the poultry industry, with significant economic losses. This study examined a group of the most important viruses that infect backyard chickens in 2 specific areas of Basrah Governorate, south of Iraq. The study analyzed avian influenza viruses (AIVs), Newcastle disease virus (NDV), and infectious bronchitis virus (IBV). Two hundred and ninety oropharyngeal swabs, 150 from Abu Al-Khasib and 140 from Shatt Al-Arab regions in the Basrah governorate, were obtained from backyard chickens with clear respiratory signs. The samples were subjected to viral RNA extraction, and the viral nucleic acids were detected using a reverse transcriptase polymerase chain reaction technique. The overall rate of viral infections was 74.8%, which varied depending on the type of virus: 15.8%, 31.3%, and 27.5% for AIV, NDV, and IBV, respectively. The NDV and IBV had much higher infection rates than that of AIV. In addition, the prevalence of AIV in the Shatt Al Arab district was significantly higher than in the Abul Khasib district. Moreover, there were no significant differences between the NDV and the IBV distributions in either of the targeted regions in this study.
국내에서는 2000년대 초까지 3년 내지 5년 간격으로 주기적인 뉴캣슬병 대유행을 겪어왔다. 이 시기에 최소한 5개의 다른 유전자형의 뉴캣슬병 바이러스가 국내 뉴캣슬병 대유행과 관련이 있었다. 1970년대 이전엔 유전자형 III형, 1980년대 중반에 유전자형 V형, 1980년대 말에서 1990년대 초에는 유전자형 VI형, 1990년대 중반에 유전자형 VIIa형, 그리고 1990년대 말부터 2000년대 초에는 유전자형 VIId형이 관련되어 있었다. 최근 국내에서 유행한 뉴캣슬병 바이러스는 중국과 일본과 같은 인근국가와 지리적인 공통점을 보였다. 과거 유행했던 다른 유전자형과 마찬가지로, 유전자형 VIId형 또한 내장친화성 강독 뉴캣슬병 바이러스였다. 현재 사용 중인 백신주와 최근 유행하는 VIId형 바이러스간에 항원적 차이는 존재하지만, 시판 백신에 의한 방어 효능에는 문제가 없는 것으로 확인되었다.
Effects of binary ethylenimine (BEI) treatment on the inactivation of infectivity and hemagglutinin of Newcastle disease virus (NDV) were studied in comparison with those of formalin treatment. Immune responses of chickens vaccinated with BEI-inactivated NDV vaccines were also investigated. The results were summarized as followings; 1. Complete loss of infectivity of NDV (Bl) was observed at 3, 7, and 24 hours after the treatment at $37^{\circ}C$ with BEI concentrations of 0.01M, 0.005M and 0.001M, respectively. 2. The hemagglutinin activity of NDV (Bl) remained constant when treated with 0.01M BEI at $37^{\circ}C$. However, it gradually decreased when treated with 0.1% or 0.2% formalin at $37^{\circ}C$. 3. When 4-week-old chickens were vaccinated with NDV vaccines prepared from Bl or Miyadera strains of NDV, inactivated with 0.1M BEI and adsorbed to aluminium hydroxide gel, favorable immune responses were observed throughout the 8 weeks of observation period. 4. When these chickens were revaccinated at 8 weeks after the first vaccination, strong anamnestic responses were evoked and the immunity maintained for 4 weeks of the observation. Though slightly bettor immune responses were observed after primary vaccination in chickens vaccinated with Bl vaccine compared with those vaccinated with Miyadera vaccine, the differences were not significant. 5. On the electron microscopy, BEI (0.01M) gave least effect to the envelope as well as capsid of NDV.
To study the specific tools for the diagnosis of Newcastle disease virus (NDV) in chicken, polymerase chain reaction (PCR) and its presumable conditions were evaluated for the detection of hemagglutinin-neuraminidase (HN) gene of NDV RNA. For these purposes, Kyojeongwon strain of the NDV was propagated in allantoic cavity of SPF embryonating chicken eggs, and viral RNA was extracted from fractionated virus after the allantoic fluids were ultracentrifuged with sucrose gradient. The first-strand cDNA was then made for the HN gene of NDV RNA by reverse transcription at $42^{\circ}C$ for 1 hour using specific primer complementary to the HN gene. The single-stranded cDNA was used as template in the PCR of the HN-DNA, and various conditions of the PCR were evaluated to set up method for the specific detection of the HN-DNA. The PCR conditions promising for the detection of HN gene consist of preheating at $94^{\circ}C$, 5 min, 30 cycles of denaturation at $94^{\circ}C$, 1 min, annealing at $55^{\circ}C$, 1 min and polymerization at $72^{\circ}C$, 2 min, and a cycle of extension at $72^{\circ}C$, 5 min. when NDVs of allantoic fluids without fractionation were applied to the above PCR condition, the HN genes were detected effectively not only from Kyojeongwon but from other velogenic strains such as Herts and a field isolate.
Newcastle disease is a serious infectious disease in the poultry industry. The commercial vaccines can only offer limited protection and some of them are expensive and need adjuvants. At present, DNA vaccines are widely used. However, the immune responses induced by DNA vaccines are too slow and low. Here, we constructed the transfer vectors with a different number of C3d as molecular adjuvants (n = 1, 2, 4, or 6), and the vectors were cloned into the optimal eukaryotic expression plasmid (pVAXI-optiF) that expressed the F gene of Newcastle disease virus (NDV), and named pVAXI-F(o)-C3d1, pVAXI -F(o)-C3d2, pVAXI-F(o)-C3d4, and pVAXI-F(o)-C3d6, respectively. Cell transfection test indicated that pVAXI-F(o)-C3d6 showed the highest expression. In vivo immunization showed that the chickens immunized with pVAXI-F(o)-C3d6 intramuscularly induced better immune responses than the chickens immunized with the other plasmids. The protective efficacy of pVAXI-F(o)-C3d6 was 80% after challenge with the highly virulent NDV strain F48E9. The results in this study showed that C3d6 could be used as a molecular adjuvant to quickly induce an effective immune response to control NDV.
Kim, Jae-Hong;Sung, Haan-Woo;Kim, Il-Hwan;Lee, Eun-Kyoung;Choi, Kang-Seuk;King, Daniel Jack
대한수의학회지
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제52권4호
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pp.213-221
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2012
A total of 18 Newcastle disease virus (NDV) isolates that were recovered from 1949 through 1997 were characterized and pathotyped. All viruses were highly virulent as determined by intracerebral pathogenicity indices ${\geq}1.81$ in day-old. These pathotypes are typical for viscerotropic velogenic NDV (VVNDV) pathotype viruses. Some differences were observed for the chicken red blood cell elution rate and thermostability of the hemagglutinin at $56^{\circ}C$. Three antigenic groups were identified by a hemagglutination-inhibition assay using NDV monoclonal antibodies. And the predominant gross lesions were as follows: discharge from the nasal cavity, tracheal mucus, petechial hemorrhage in the heart fat, kidney urates and hemorrhage with or without necrosis in the gastrointestinal tract. Severe hemorrhagic or necrotic lesions were also noted in the lymphoid organs and were localized primarily in the spleen and cecal tonsil. However, differences in the occurrence and frequency of the gross lesions were observed between the virus strains. Among them, NDV strains that induced neurological symptoms belonged only to genotype VI. This strain had spread throughout Korea during the late 1980s to the 1990s, which suggests that specific VVNDVs genotypes might result in neurological symptoms.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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