상용 복막투석액에 함유된 고농도의 포도당과 포도당 분해산물(glucose degradation products: CDP)이 복막의 비후, 복막 투과성의 증가 및 한외여과 부전과 같은 복막의 구조적, 기능적 변화를 초래하리라 추정되고 있다. 본 연구에서는 CDP성분이 사람 복막중피세포 활성화에 미치는 영향을 검색하였고 또 이때 ROS와 PKC가 관여하는지를 검색하였다. 혈청이 배제된 M199 배양액으로 성장을 동일화시킨 사람 복막중피세포를 GDP인 methylglyoxal(MGO), acetaldehyde, 그리고 3,4-dioxyglucosone-3-ene(3,4-DGE)으로 48시 간 동안 자극하였고, 복막의 투과성에 대한 지표로서 혈관내피성장인자(vascular endothelial growth factor VEGF)를, 섬유화의 지표로서 fibronectin과 heat shock protein 47(hsp47)의 단백을 정량하였다. 활성산소족(reactive oxygen species:ROS)과 protein kinase C(PKC)의 관여여부는 각각 항산화제 N-acetylcystein(NAC)과 PKC 억제제 calphostin C의 억제 효과로 검색하였다. MGO는 대조군과 비교하여 VEGF 분비를 1.9배, fibronectin분비를 1.5배 그리고 hsp47 표현을 1.3배로 유의하게 증가시켰다(p<0.05). MGO에 의한 VEGF 상향 조절은 calphostin C와 NAC에 의하여 유의하게 억제되었다. 사람 복막중피세포에서 VEGF 분비는 acetaldehyde에 의하여 증가하였으나 3,4-DGE에 의하여 억제되었고, fibronectin 분비와 hsp47 표현은 acetaldehyde나 3,4-DGE에 의하여 영향을 받지 않았다. 이상을 종합할 때, ROS생산과 PKC활성화가 상용투석액내 함유된 MGO에 의한 점진적인 복막의 투과성 증가, 세포외기질 축적 그리고 복막 섬유화를 유발하는 주된 신호체계로서 이를 선택적으로 억제함으로써 복막의 기능을 유지할 수 있을 것으로 생각된다.
연구배경: 황사는 동북아시아에서 자연 발생하는 현상으로, 지름 $10{\mu}m$ 이하의 미세먼지(particulate matter 10, $PM_{10}$)를 다수 포함하여, 흡입하면 하부기관지 및 폐의 가스-교환부분까지 침착 가능하여 호흡기계에 손상을 일으킬 수 있다. 본 연구에서는 황사에 포함된 $PM_{10}$을 기관지상피세포에 작용시켜 활성산소 및 $NF{\kappa}B$, $TGF-{\beta}$, fibronectin이 증가 여부를 확인하고 섬유화의 신호경로를 규명하고자 하였다. 방 법: 공기포집기로 포집한 $PM_{10}$ 입자를 추출하여 기관지 상피세포인 WI-26 VA4 cells (KCLB)에 $PM_{10}$을 농도에 맞게 노출시켰다(0, 50, $100{\mu}g/ml$). ROS는 DCF-DA를 세포에 반응시킨 후 생성된 DCF를 FACScan을 이용해 측정하였다. $TGF-{\beta}$, fibronectin, $NF{\kappa}B$는 western blotting으로 분석하였다. 항산화제인 NAC를 이용하여 각 물질의 발현 억제 여부를 측정하였다. 결 과: $PM_{10}$을 가했을 때 대조군에 비하여 $50{\mu}g/ml$, $100{\mu}g/ml$에서 ROS, $TGF-{\beta}$, fibronectin, $NF{\kappa}B$ 발현이 유의하게 증가하였고, 항산화제인 NAC를 처리한 세포는 ROS, $TGF-{\beta}$, fibronectin, $NF{\kappa}B$의 발현이 $50{\mu}g/ml$, $100{\mu}g/ml$에서 유의하게 감소하였다. 결 론: 황사의 $PM_{10}$은 WI-26 VA4 cells에서 ROS 생성을 증가시키고 $NF-{\kappa}B$, $TGF-{\beta}$, fibronectin 생성을 증가시켜 섬유화에 기여할 것으로 사료된다.
Kwon, Hyuk-Woo;Shin, Jung-Hae;Cho, Hyun-Jeong;Rhee, Man Hee;Park, Hwa-Jin
Journal of Ginseng Research
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제40권1호
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pp.76-85
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2016
Background: Binding of adhesive proteins (i.e., fibrinogen, fibronectin, vitronectin) to platelet integrin glycoprotein IIb/IIIa (${\alpha}IIb/{\beta}3$) by various agonists (thrombin, collagen, adenosine diphosphate) involve in strength of thrombus. This study was carried out to evaluate the antiplatelet effect of total saponin from Korean Red Ginseng (KRG-TS) by investigating whether KRG-TS inhibits thrombin-induced binding of fibrinogen and fibronectin to ${\alpha}IIb/{\beta}3$. Methods: We investigated the effect of KRG-TS on phosphorylation of vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP) and dephosphorylation of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) and Akt, affecting binding of fibrinogen and fibronectin to ${\alpha}IIb/{\beta}3$, and clot retraction. Results: KRG-TS had an antiplatelet effect by inhibiting the binding of fibrinogen and fibronectin to ${\alpha}IIb/{\beta}3$ via phosphorylation of VASP ($Ser^{157}$), and dephosphorylation of PI3K and Akt on thrombin-induced platelet aggregation. Moreover, A-kinase inhibitor Rp-8-Br-cyclic adenosine monophosphates (cAMPs) reduced KRG-TS-increased VASP ($Ser^{157}$) phosphorylation, and increased KRG-TS-inhibited fibrinogen-, and fibronectin-binding to ${\alpha}IIb/{\beta}3$. These findings indicate that KRG-TS interferes with the binding of fibrinogen and fibronectin to ${\alpha}IIb/{\beta}3$ via cAMP-dependent phosphorylation of VASP ($Ser^{157}$). In addition, KRG-TS decreased the rate of clot retraction, reflecting inhibition of ${\alpha}IIb/{\beta}3$ activation. In this study, we clarified ginsenoside Ro (G-Ro) in KRG-TS inhibited thrombin-induced platelet aggregation via both inhibition of $[Ca^{2+}]_i$ mobilization and increase of cAMP production. Conclusion: These results strongly indicate that KRG-TS is a beneficial herbal substance inhibiting fibrinogen-, and fibronectin-binding to ${\alpha}IIb/{\beta}3$, and clot retraction, and may prevent platelet ${\alpha}IIb/{\beta}3$-mediated thrombotic disease. In addition, we demonstrate that G-Ro is a novel compound with antiplatelet characteristics of KRG-TS.
Park, Su-Jung;Leesungbok, Richard;Ahn, Su-Jin;Im, Byung-Jin;Lee, Do Yun;Jee, Yu-Jin;Yoon, Joon-Ho;Cui, Taixing;Lee, Sang Cheon;Lee, Suk Won
The Journal of Advanced Prosthodontics
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제7권6호
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pp.496-505
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2015
PURPOSE. To determine the effect of fibronectin (FN)-conjugated, microgrooved titanium (Ti) on osteoblast differentiation and gene expression in human bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs). MATERIALS AND METHODS. Photolithography was used to fabricate the microgrooved Ti, and amine functionalization (silanization) was used to immobilize fibronectin on the titanium surfaces. Osteoblast differentiation and osteoblast marker gene expression were analyzed by means of alkaline phosphatase activity assay, extracellular calcium deposition assay, and quantitative real-time PCR. RESULTS. The conjugation of fibronectin on Ti significantly increased osteoblast differentiation in MSCs compared with non-conjugated Ti substrates. On the extracellular calcium deposition assays of MSCs at 21 days, an approximately two-fold increase in calcium concentration was observed on the etched 60-${\mu}m$-wide/10-${\mu}m$-deep microgrooved surface with fibronectin (E60/10FN) compared with the same surface without fibronectin (E60/10), and a more than four-fold increase in calcium concentration was observed on E60/10FN compared with the non-etched control (NE0) and etched control (E0) surfaces. Through a series of analyses to determine the expression of osteoblast marker genes, a significant increase in all the marker genes except type I collagen ${\alpha}1$ mRNA was seen with E60/10FN more than with any of the other groups, as compared with NE0. CONCLUSION. The FN-conjugated, microgrooved Ti substrate can provide an effective surface to promote osteoblast differentiation and osteoblast marker gene expression in MSCs.
신장섬유화는 내 외부적인 요인들에 의해 발생하며, 그 요인들에 의해 염증이 생기고 지속적인 손상이 일어날 경우 신기능의 상실이 유발된다. 또한 신장섬유화는 세포 외 기질의 과다축적, TGF-${\beta}$나, TNF-${\alpha}$, IL-1과 같은 사이 토카인에 의해 발생하며, TGF-${\beta}$는 신장 섬유화의 과정과 Type I collagen과 fibronectin, PAI-1을 포함한 섬유화 관련 인자들의 발현 유도에 중요한 역할을 한다. 본 연구에서는 TGF-${\beta}$를 처리한 신장섬유화 유도 모델에서 Moringa oleifera Lam 추출물에 대한 섬유화 관련 인자들의 영향을 확인하였다. 실험 결과 TGF-${\beta}$로 유도된 신장 섬유화 세포에서 모링가 추출물이 fibronectin, Type I collagen과 PAI-1의 단백질 및 mRNA 발현을 저해하였으며, 모링가 추출물 중 모링가 뿌리추출물이 가장 영향이 있는 것으로 확인 되었다. 모링가 뿌리추출물이 어떠한 기전을 통하여 섬유화 관련 인자들의 발현을 조절하는지 알아보기 위한 TGF-${\beta}$로 유도된 $T{\beta}RII$ 및 그 하위 기전의 인산화 정도를 확인한 실험에서 모링가 뿌리추출물이 TGF-${\beta}$로 유도된 $T{\beta}RII$과 그 하위기전의 Smad4, ERK의 인산화를 저해하였다. 그러나 TGF-${\beta}$에 의해 유도된 JNK와 p38, PI3K/AKT의 인산화에는 영향이 없었다. 따라서 모링가 뿌리추출물이 TGF-${\beta}$로 유도된 신장 섬유아세포에서 $T{\beta}RII$와 그 하위 기전인 Smad4, ERK를 통해서 Type I collagen 과 fibronectin, PAI-1의 발현을 조절하여 섬유화를 저해 한다는 것을 예상할 수 있다. 결론적으로 모링가 뿌리추출물이 섬유화 치료 및 완화에 좋은 물질이 될 수 있을 것으로 생각된다.
capsular polysaccharide(CPS), alpha toxin과 재조합 fibronectin binding protein (FnBP)으로 구성된 유방염 백신을 개발하여 야외효능실험을 수행하였다. 이 subunit 백신은 비유우 23두와 처녀우 20두를 대상으로 10개월동안 각각 수행되었다. 비유우는 매 3주간격으로 2회 백신접종을 하였으며 대조군은 PBS를 상유방림조절 주위에 피하주사하였다. 처녀우를 대상으로 한 실험에서는 분만 8주전부터 시작하여 매 3주간격으로 2회 비유우 백신접종부위와 동일하게 접종하였다. 접종후 비유우에서는 황색포도상구균에 의한 총유선내 감염율이 대조균에 비해 유의성있게 감소하였으며 (p<0.001) 처녀우에서도 총유선내 감염이 백신 접종균(1.6%)이 대조군(11.7%)에 비해 다음 비유기동안 유의성있게 낮았다. (p<0.001). 비유기동안 백신접종한 젖소의 체세포수는 변화가 없었으며 처녀우에서는 추가접종후 백신접종군에서 대조군의 체세포수에 비해 낮았지만 통계학적으로 유의성은 없었다(p>0.05). 본 실험결과 황색포도구균에 대한 유방염 아단위 백신은 비유우와 처녀우에서 체세포수를 증가시키지 않고 총 유선내 감염율을 낮추어주었다. 하지만 본 실험은 1군데의 목장을 대상으로 하였기 때문에 향후 대규모 목장을 대상으로 하는 유방염 백신의 야외효능실험이 심도있게 이루어져야 한다고 생각된다.
The purpose of this vitro study was to evaluate attachment and proliferation of human pulpal cells to the attachment glycoprotein-coated and non-coated culture dishes. Well known adhesive glycoproteins were used, such as type I collagen, type IV collagen, fibronectin, laminin, and vitronection. Each adhesive glycoproteins applied onto the culture dishes. In this study, the protein coated and non-coated dishes were classified as each groups. Human pulpal cells onto each culture dishes. After 90 minute, 4 hour and 24 hour incubation attached cells in each group were counted with hematocytometer for evaluation of the attachemnt of human pulpal cells. The configurations of attached human pulpal cells were done by SEM observation. The results as follows : 1. After 90 minute incubation the score of attachment of human pulpal cells was best in laminin-coated group among groups. Then fibronectin, type IV collagen group were better, and all proteins were higher than control. 2. After 4 hour incubation the numbers of attachment of human pulpal cells were most in fibronectin coated group. 3. After 24 hour incubation all of adhesive glycoproteins showed high and similar attachemtn effect to human pulpal cells. 4. In SEM observation, fibronectin and type IV collagen groups showed well spreaded human pulpal cells, then laminin group was moderately spreaded, and vitronectin group was mildly spreaded as well as control group.
CD29 $({\beta}1-integrins)$ is one of major adhesion molecules involved in regulating cell adhesion, migration and morphological changes. In this study, we investigated the regulatory role of CD29 in monocytic functions using monocytic cell line U937 cells. CD29 was found to be one of highly expressed membrane proteins in U937 cells, according to flow cytometric analysis. The activation of CD29 by agonistic antibody MEM101A and extracellular matrix protein (ECM) fibronectin strongly induced cell-cell and cell-fibronectin adhesions. However, blocking antibodies to CD98 and CD147 showed different inhibitory features in these two adhesion events. Furthermore, U0126, an ERK inhibitor, only blocked cell-cell adhesion but not cell-fibronectin adhesion, indicating that cell-cell or cell-fibronectin adhesion events may be regulated by different molecular mechanisms. Meanwhile, CD29 activation also enhanced ROS generation but not phagocytic ability, and similarly radical scavenger N-acetyl-L-cysteine strongly blocked CD29-mediated cell-cell adhesion, implying that ROS may play a critical role in up-regulating cell-cell adhesion. Therefore, our data suggest that the activation of CD29 may be critically involved in regulating monocytic cell-mediated cell-cell adhesion and ROS generation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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